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[交流]
【求助/交流】求助环境样品PCR技术
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我有一组环境样品，想扩增其16S基因序列，再做大量克隆，重现样品中各物种的原始组成状况。我用的是巢式PCR，先后用两对引物来扩增，结果跑胶条带很亮。 我的问题是：环境样品，肯定会存在里面物种DNA含量差异的问题，如果我的样品中某一物种的DNA量非常少，在经过PCR放大之后，会不会对原始DNA组成造成很大的破坏。 例如，如果样品中，物种A含量为1,B的含量为100（比值为1:100）那么经过两轮PCR后，A:B的比值会不会达到1:1000或者其他的差异非常远的数呢，如何控制我PCR反应的循环数呢？有没有哪位虫友做过类似的实验，诚心请教！ PS：物种很丰富，但我只想要16S，用一次PCR，跑胶基本上看不到带，只能用巢式 我想知道PCR循环数与原始DNA相对含量之间的关系有多大？循环数一般设为多少比较好…… [ Last edited by xp198766 on 2011-3-19 at 16:40 ] |
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