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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组 质粒在BL21表达
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wsz2056

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组 质粒在BL21表达 已有8人参与

重组质粒，为什么在BL21 中表达不出来，IPTG1M，终浓度0.5，诱导时间过夜，温度20-25度个不等 ，但是就是不表达。
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1楼 2011-03-14 15:27:37
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wsz2056

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by _然然 at 2011-03-31 08:33:42:
刚开始做原核表达 用的是pet-20b载体，转BL21，连单菌落也不长 很是郁闷，随想听听你的看法 呵呵

我用的载体PET21a，双酶切之前，因为我用的是nde1和sal1这两个酶切位点，nde1不好被切开，我于是把PET21A放到了JM110中，然后提质粒，然后再切开的。
然后我观察了我的目的片段序列，发现它有稀有密码子，所以换了表达载体，用的是Transtter de3 这个表达载体，所以我的菌长的可以也有活性
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13楼2011-03-31 11:05:23
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对质粒进行鉴定了吗？重组是否成功？
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2楼2011-03-14 16:20:37
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不表达的因素很多，如ORF、密码子偏爱性等等。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-03-14 16:28:59
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-03-14 17:57:04
先用Rosetta 试一下，如果还不行就换个载体。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-03-14 17:20:25
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