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zwlr116812

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】胶回收没条带 已有2人参与

PHY300PLK是穿梭载体,我用BamHI和HindIII双酶切PHY300PLK,PQE-gfp,目的是把GFP连到PHY300PLK上,然后转到大肠杆菌的感受态里面去。但目前我只是双酶切后,用5微升检测,能看到酶切完全有很亮的条带,然后我进行胶回收,切胶时的条带也很亮,回收完后再检测就啥也没有了,已经连续做的三次,都是同样的结果。后来怀疑是试剂盒的问题,就回收了下其他的一个片段,结果那个片段的回收效果很好。所以现在百思不得其解,请各位高手指点迷津。


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LeVan2008

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
回收的时候,你把第一步的溶胶溶液倒到提取质粒的那种吸附柱试一下,然后再继续下面的实验……就是不要用原来试剂盒的那个吸附柱,用质粒吸附柱代替
3楼2011-05-24 17:54:25
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hyy2005bne

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
胶回收效率会降低,楼主做了许多次应该排除了操作手法这方面的原因了。再仔细想想有没有那个环节遗漏了没有考虑,可能是某个微小的原因呢。希望楼主早日成功
2楼2011-04-01 17:11:23
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