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sxxuan

金虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR结果，谢谢！已有9人参与

做PCR扩增，结果出现如图的情况，我都不知道怎么分析了，请大家帮帮忙，谢谢！

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你的日子如何，你的力量也必如何！

1楼 2011-02-24 16:47:12

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woshishao

金虫 (初入文坛)

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经验分享与讨论

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+3): 鼓励新虫参与 2011-02-25 13:00:41

首先问楼主个问题，你的电泳跑时电压时多少？
然后对于楼主的PCR电泳图，我也出现过类似的情况。
经过个人总结，简称“涂布状条带”。
产生原因：1.PCR引物特异性不足，PCR扩增产生很多杂带，在电泳时如果使用大电压，如120V,130V时PCR条带会跑的很宽，以至于和杂带连接成一片成涂布状。
解决方法：1.使用80V左右电压跑，你可以发现PCR条带都被压的很密集，非特异性扩增和目的条带分的很开，不管分析还是回收都可以说明了。不过为了数据漂亮，最好重设引物。

产生原因：2.凝胶没有凝好就跑电泳了，迁移率有问题，故出现上述情况。
解决方法：2.让凝胶凝集时间最好有20分钟-30分钟。

产生原因：3.模板污染，一般是污染了基因组DNA，导致相对引物特异性降低，扩增出很多条带。
解决方法：3。操作严谨，不要污染！个人觉得这个原因，一般注意了就不会出现。