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xukun1176

银虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】液质联用中三氟乙酸到底该不该加,有什么利弊?已有12人参与

做C18高效液相色谱分离蛋白和多肽时,为了色谱保留,有时会加千分之一的三氟乙酸,不过这种条件能用在液-质联用中吗(ESI源,离子阱)?
   据说TFA会:1.抑制离子化,因为样品离子与TFA生成离子对,导致带电离子中性化。2.今天在网上看到说,TFA会彻底污染仪器。
   另外,请问大家,如果会抑制离子化的话,那是只抑制负离子模式还是正、负离子模式都会被抑制?
请大家多多赐教,谢谢!!!

[ Last edited by xukun1176 on 2011-1-19 at 17:38 ]
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cpn

木虫 (正式写手)

★ ★
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opq691(金币+1): O(∩_∩)O谢谢 2011-01-19 21:39:02
我们这ESI和MALDI源的质谱做蛋白或者多肽时,直接进样往往加少量TFA或FA,抑制加钠峰。
TFA的浓度要控制的比较低,质谱里面的一些器件,会受腐蚀。
2楼2011-01-19 21:06:03
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caff

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
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chiraler(金币+1): 谢谢! 2011-01-20 19:28:50
加入少量的TFA在正谱条件下可以提高蛋白多肽的离子化效率,也可以加入甲酸达到这一目的,做ESI,或MALDI都可以,一般我加入的浓度是0.1%TFA,对机器没有太大影响
3楼2011-01-20 09:45:24
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xukun1176

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by cpn at 2011-01-19 21:06:03:
我们这ESI和MALDI源的质谱做蛋白或者多肽时,直接进样往往加少量TFA或FA,抑制加钠峰。
TFA的浓度要控制的比较低,质谱里面的一些器件,会受腐蚀。

请问,你们TFA的浓度通常控制在多少呢?会不会发生TFA与样品结合的现象,从而出现(M+114)的峰?谢谢!!!
4楼2011-01-20 10:55:33
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xukun1176

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by caff at 2011-01-20 09:45:24:
加入少量的TFA在正谱条件下可以提高蛋白多肽的离子化效率,也可以加入甲酸达到这一目的,做ESI,或MALDI都可以,一般我加入的浓度是0.1%TFA,对机器没有太大影响

就是说在正离子模式下,流动相中可以含有TFA,而不会抑制样品的离子化,是吗?
万分感谢!!!

[ Last edited by xukun1176 on 2011-1-20 at 13:31 ]
5楼2011-01-20 12:57:34
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xukun1176

银虫 (小有名气)

看来大家都回家过年了。。。。。
6楼2011-01-20 18:11:30
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cpn

木虫 (正式写手)


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一般是0.1%,不是回家过年啦,做实验去了的。。。。
FA一样也是加0.1%。
这是在液相中添加TFA和FA的影响的一些案例,sigma的。
质谱当中加酸和不加酸对蛋白的离子化效率影响还蛮大的,至少在我做的不少蛋白的MALDI中可以看到很明显的变化。对ESI的影响也很大的,蛋白本来就是比较不好离子化的,可以参考下《电喷雾质谱应用技术》。不过+TFA的峰偶还没见过,蛋白用ESI做的我做的很少。
哈哈加114我怎么感觉像是加了一个Asp(该句纯属瞎掰)??

[ Last edited by cpn on 2011-1-21 at 09:22 ]
7楼2011-01-21 09:12:38
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xysmile

银虫 (初入文坛)


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引用回帖:
Originally posted by xukun1176 at 2011-01-19 17:19:29:
做C18高效液相色谱分离蛋白和多肽时,为了色谱保留,有时会加千分之一的三氟乙酸,不过这种条件能用在液-质联用中吗(ESI源,离子阱)?
   据说TFA会:1.抑制离子化,因为样品离子与TFA生成离子对,导致带电离子 ...

我们实验室一般也是加0.1%的FA,TFA印象中听老师说也行~~~
ps:lz是不是在色谱网也发了同样的帖子啊,我也是正好看到,很巧
8楼2011-01-21 09:19:22
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JOAN19850425

银虫 (小有名气)


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最好不佳 我以前做的时候加过 响应高 会掩盖峰
9楼2011-01-28 19:57:45
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kele9955

木虫 (著名写手)


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TFA 会有抑制电离的缺点,改用甲酸应该好些。。。。。
昆嵛山的浪漫爱情传说,是今生你我的再次缠绵!
10楼2011-01-29 11:46:37
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