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moresha

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】流式PI单染的凋亡峰很小

各位大侠,我现在在做的是流式PI单染,给药24/48小时后,看到的细胞形态都发生了变化,而且漂浮的细胞也挺多的,但细胞收集后做了好几次都没做出来,都是同一个问题--凋亡峰很低。
但是应该不是我的药物的问题,因为我用的阳性药物对照组也没做出来。
而且我药物作用72小时后我的ladder带是跑出来了的。
我的PI单染的步骤大致如下:胰酶消化收集细胞,PBS洗2遍,离心的条件是1000rpm,10min。75%乙醇固定过夜,相同条件离心,PBS洗2遍后再用少量PBS重悬,加入RNase A,37℃水浴30min,再加入PI避光染色30min,上机检测。
情况大致就是这样的,但每次连阳性都做不出来,不知道是什么原因了,所以请各位指教了。。
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windbells636

金虫 (小有名气)


离心时间太长了吧
2楼2011-02-16 08:30:30
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亚峰本来就是假阴性很高的方法
3楼2011-02-16 08:54:33
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