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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】流式PI单染的凋亡峰很小
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moresha

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】流式PI单染的凋亡峰很小

各位大侠，我现在在做的是流式PI单染，给药24/48小时后，看到的细胞形态都发生了变化，而且漂浮的细胞也挺多的，但细胞收集后做了好几次都没做出来，都是同一个问题--凋亡峰很低。
但是应该不是我的药物的问题，因为我用的阳性药物对照组也没做出来。
而且我药物作用72小时后我的ladder带是跑出来了的。
我的PI单染的步骤大致如下：胰酶消化收集细胞，PBS洗2遍，离心的条件是1000rpm，10min。75%乙醇固定过夜，相同条件离心，PBS洗2遍后再用少量PBS重悬，加入RNase A，37℃水浴30min，再加入PI避光染色30min，上机检测。
情况大致就是这样的，但每次连阳性都做不出来，不知道是什么原因了，所以请各位指教了。。
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1楼 2011-01-10 09:35:32
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windbells636

金虫 (小有名气)
离心时间太长了吧
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2楼2011-02-16 08:30:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
亚峰本来就是假阴性很高的方法
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3楼2011-02-16 08:54:33
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