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moresha

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】流式PI单染的凋亡峰很小

各位大侠，我现在在做的是流式PI单染，给药24/48小时后，看到的细胞形态都发生了变化，而且漂浮的细胞也挺多的，但细胞收集后做了好几次都没做出来，都是同一个问题--凋亡峰很低。
但是应该不是我的药物的问题，因为我用的阳性药物对照组也没做出来。
而且我药物作用72小时后我的ladder带是跑出来了的。
我的PI单染的步骤大致如下：胰酶消化收集细胞，PBS洗2遍，离心的条件是1000rpm，10min。75%乙醇固定过夜，相同条件离心，PBS洗2遍后再用少量PBS重悬，加入RNase A，37℃水浴30min，再加入PI避光染色30min，上机检测。
情况大致就是这样的，但每次连阳性都做不出来，不知道是什么原因了，所以请各位指教了。。

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