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huangwensh

木虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】western的pvdf膜和NC膜有什么区别?

各位前辈,我做的一抗200多kd,我用的是PVDF膜但是总是加完ECL时整张膜都发光,我怀疑我的抗体和膜有结合,我现在想改用NC膜,不知道这两种膜有什么区别,各需要注意什么?
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hfkset

铜虫 (初入文坛)


★ ★
huangwensh(金币+1): 2011-01-10 16:10:45
dhd997(金币+2):good 2011-01-10 16:46:20
但是使用PVDF膜前,一定要先用无水甲醇预处理,再在transfer buffer中平衡好才可以使用(PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合)。经过预处理的PVDF膜在转膜时,可以使用不含甲醇的transfer buffer。而使用NC膜时,有的需要用无水甲醇处理,有的则不必,直接用transfer buffer平衡好就可以了。
4楼2011-01-10 14:05:28
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)


★ ★
huangwensh(金币+1): 2011-01-09 09:51:36
dhd997(金币+2):good 2011-01-09 10:35:47
两者的区别你上millipore肯定能够找到最完成的差异分析。但是有些膜整张发光,有可能是封闭的不好,二抗浓度太高等原因导致的。
2楼2011-01-08 19:45:23
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huangwensh

木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2011-01-08 19:45:23:
两者的区别你上millipore肯定能够找到最完成的差异分析。但是有些膜整张发光,有可能是封闭的不好,二抗浓度太高等原因导致的。

你说的这两个原因我都改进过了,可是没有效果?
3楼2011-01-09 09:52:28
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huangwensh

木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by hfkset at 2011-01-10 14:05:28:
但是使用PVDF膜前,一定要先用无水甲醇预处理,再在transfer buffer中平衡好才可以使用(PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合)。经过预处理的PVDF膜在转膜时, ...

谢谢还有什么其他很重要的需要注意吗,比如他们两个是不是都适合大分子,或者转膜时间有什么不同?
5楼2011-01-10 16:11:46
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