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huangwensh

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】western的pvdf膜和NC膜有什么区别？

各位前辈，我做的一抗200多kd,我用的是PVDF膜但是总是加完ECL时整张膜都发光，我怀疑我的抗体和膜有结合，我现在想改用NC膜，不知道这两种膜有什么区别，各需要注意什么？
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1楼 2011-01-07 17:21:47
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hfkset

铜虫 (初入文坛)
★ ★
huangwensh(金币+1): 2011-01-10 16:10:45
dhd997(金币+2):good 2011-01-10 16:46:20
但是使用PVDF膜前，一定要先用无水甲醇预处理，再在transfer buffer中平衡好才可以使用（PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合）。经过预处理的PVDF膜在转膜时，可以使用不含甲醇的transfer buffer。而使用NC膜时，有的需要用无水甲醇处理，有的则不必，直接用transfer buffer平衡好就可以了。
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4楼2011-01-10 14:05:28
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★
huangwensh(金币+1): 2011-01-09 09:51:36
dhd997(金币+2):good 2011-01-09 10:35:47
两者的区别你上millipore肯定能够找到最完成的差异分析。但是有些膜整张发光，有可能是封闭的不好，二抗浓度太高等原因导致的。
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2楼2011-01-08 19:45:23
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huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2011-01-08 19:45:23:
两者的区别你上millipore肯定能够找到最完成的差异分析。但是有些膜整张发光，有可能是封闭的不好，二抗浓度太高等原因导致的。

你说的这两个原因我都改进过了，可是没有效果？
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3楼2011-01-09 09:52:28
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huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hfkset at 2011-01-10 14:05:28:
但是使用PVDF膜前，一定要先用无水甲醇预处理，再在transfer buffer中平衡好才可以使用（PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合）。经过预处理的PVDF膜在转膜时， ...

谢谢还有什么其他很重要的需要注意吗，比如他们两个是不是都适合大分子，或者转膜时间有什么不同？
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5楼2011-01-10 16:11:46
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