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xiaofeiyu8075

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】乳酸菌发酵上清液是先超滤浓缩再盐析好呢，还是先盐析再超滤呢？急，求�

之前的发酵上清液是先硫酸铵分级沉淀（50%——70%）得到蛋白的，跑电泳后分子量大约是65KD。现在又发酵了一大批，目前有两个方案：
  1.  2L的发酵液盐析起来比较麻烦，所以想先将2L发酵液先经过超滤浓缩后再进行盐析，超滤膜截留分子量计划用30KD的，但是浓缩后的不知道是不是还可以采用之前的硫酸铵饱和度来沉淀蛋白。
  2. 将2L发酵液先按之前盐析方法沉淀蛋白，应该蛮蛮麻烦的，不过沉淀饱和度可以不用变，之后再用截留分子量30KD来超滤膜来除盐和除去小分子量蛋白。

不知道这两个方案该用哪个，觉得都有弊端，还希望有经验的前辈们指点！
  非常感谢！

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1楼 2011-01-02 12:01:45

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simiao8793

银虫 (小有名气)

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★ ★
最爱花诗雨(金币+2):谢谢热心交流 2011-01-05 16:15:12
xiaofeiyu8075(金币+5):谢谢你 2011-01-14 14:35:27

我之前做过类似的实验，发酵液体积1.5升，是先分级沉淀再超滤浓缩的，在超滤浓缩的时候可以用低盐缓冲液洗涤，起到脱盐的效果。如果用你的第一种方法的话后面应该还是要再加一步除盐的过程吧，至于饱和度有没有变只要取一小部分先实验一下就可以了

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