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可米kemi

银虫 (小有名气)


[交流] 【讨论】求助高人

请问,
    我用高HPLC对五个样品进行手性拆分,以前用10:90的水和甲醇做流动相能冲得出样品峰,后来因为一直拆不开,我又用了TEAA缓冲盐(分别是0.1%和0.5%),现在我想看看样品有没有分解变质,就又用10:90的水和甲醇做流动相冲。
    结果只有一个物质的样品出峰了,而且分离度还变小了(以前也有分开一点,但没有达到基线分离),另外几个都没有样品峰出现。
    又及,出峰的那个样品峰保留时间基本没怎么变,只快了一点点,峰面积也没怎么变。而其他几个样品就是没有样品峰。要说样品变质的话,我前一天用TEAA和甲醇做流动相的时候还有样品峰的。急切等待回答。谢谢。

[ Last edited by 可米kemi on 2010-12-29 at 14:14 ]
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可米kemi

银虫 (小有名气)


没有用过梯度洗脱,我想就是对每个药物异构体手性拆分,也不要求一次性全都拆出来,就没必要用梯度洗脱了吧。
5楼2010-12-30 13:43:54
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可米kemi

银虫 (小有名气)


自己回复并再次提问

造成这个原因,应该是由于手性柱中的PH值发生改变,其中出峰的那个样品由于对PH值不敏感;而另外几个样品对PH值的变化反应较大,使样品分子质子化,从而难出峰。
    问,手性柱中的PH值会改变吗?是不是应为连接臂上硅上面的羟基所引起的?
    还有说加四氢呋喃能提高分离度。机理是什么呢?
2楼2010-12-30 10:08:09
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forging

金虫 (小有名气)



可米kemi(金币+1):谢谢参与
你是没试过采用梯度洗脱
3楼2010-12-30 10:49:22
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jessicaxin20

金虫 (正式写手)



可米kemi(金币+1):谢谢参与
有点复杂~    帮你顶起看有没高手吧,  我解决不了
4楼2010-12-30 10:56:39
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