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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【讨论】求助高人
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可米kemi

银虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】求助高人

请问，
    我用高HPLC对五个样品进行手性拆分，以前用10:90的水和甲醇做流动相能冲得出样品峰，后来因为一直拆不开，我又用了TEAA缓冲盐（分别是0.1%和0.5%），现在我想看看样品有没有分解变质，就又用10:90的水和甲醇做流动相冲。
    结果只有一个物质的样品出峰了，而且分离度还变小了（以前也有分开一点，但没有达到基线分离），另外几个都没有样品峰出现。
    又及，出峰的那个样品峰保留时间基本没怎么变，只快了一点点，峰面积也没怎么变。而其他几个样品就是没有样品峰。要说样品变质的话，我前一天用TEAA和甲醇做流动相的时候还有样品峰的。急切等待回答。谢谢。

[ Last edited by 可米kemi on 2010-12-29 at 14:14 ]
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1楼 2010-12-28 16:15:09
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forging

金虫 (小有名气)
★
可米kemi(金币+1):谢谢参与
你是没试过采用梯度洗脱
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3楼2010-12-30 10:49:22
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可米kemi

银虫 (小有名气)

自己回复并再次提问

造成这个原因，应该是由于手性柱中的PH值发生改变，其中出峰的那个样品由于对PH值不敏感；而另外几个样品对PH值的变化反应较大，使样品分子质子化，从而难出峰。
    问，手性柱中的PH值会改变吗？是不是应为连接臂上硅上面的羟基所引起的？
    还有说加四氢呋喃能提高分离度。机理是什么呢？
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2楼2010-12-30 10:08:09
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jessicaxin20

金虫 (正式写手)
★
可米kemi(金币+1):谢谢参与
有点复杂~    帮你顶起看有没高手吧，  我解决不了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-30 10:56:39
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可米kemi

银虫 (小有名气)
没有用过梯度洗脱，我想就是对每个药物异构体手性拆分，也不要求一次性全都拆出来，就没必要用梯度洗脱了吧。
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5楼2010-12-30 13:43:54
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