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smmuww1981

金虫 (初入文坛)

[交流] 全血DNA留取

全血DNA留取
1.将新鲜抗凝全血或冻存抗凝全血0.5~1ml置于1.5ml Beckman离心管中
2.补满细胞裂解缓冲液(0.32mol/L蔗糖; 1% Triton X-100; 0.005mol/L MgCl2•6H2O; 0.012 mol/L Tris-HCl pH7.5)→ 混合,剧烈振荡12000rpm离心5min
3.收集沉淀  
4.重复2,3步骤3次,直至沉淀为无色
5.加入200PCR裂解液A
6.37℃放置过夜(一般为8个小时)
7.抽取PCR裂解物(约200µl) + 200µl 饱和酚→充分混合→12000rpm离心5min→取上清+200µl酚氯仿→12000rpm离心10min→取上清+200µl氯仿→12000rpm离心10min
8.取上清+1/5体积的乙酸铵→2倍体积的无水乙醇→充分混匀→静置1分钟→12000rpm离心10min→弃上清+70%乙醇洗涤→12000rpm离心5min
9.弃上清,自然风干(2-3个小时)
10.用100 µl TE溶液溶解沉淀
11.分装,-80℃液氮保存(10µl一管)
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