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neversaydi

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shuaisuo1984 at 2010-12-14 11:01:13:
我们一般180KD的转膜是40v,3h,湿转,都能出来。希望对你有帮助~~~

恩  谢谢   电泳条件呢?也是80V ?多长时间呢?
neverdaydie!
11楼2010-12-14 14:09:37
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abeywf

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+5):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-12-17 00:06:06
我们有做。分离胶8%,层积胶6%。60v、18min,120v、70min。
转膜的话,4℃,40v过夜(15h),因为是大蛋白,所以需要时间比较长,效果才好。如果两块胶一起转的话,需要50v。展示一下我的作品吧。
12楼2010-12-16 21:01:39
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shagrace

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做的都是100V,1H,200mA,不管多大分子量,都出来了
13楼2010-12-18 14:06:56
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neversaydi

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shagrace at 2010-12-18 14:06:56:
我做的都是100V,1H,200mA,不管多大分子量,都出来了

那你们配的胶呢?
我们actin的条件差不多是 10% 5% 的胶
80V到红带出来,转成120V,一直到样品跑到底。
  如果分子量180kd的话,  你的这个条件,电泳能出来,那胶的浓度是多少?
跟楼上一样? 转膜呢?
谢谢  回答。  我主要还是很菜,,,呵呵
neverdaydie!
14楼2010-12-21 08:50:35
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shagrace

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by neversaydi at 2010-12-21 08:50:35:


那你们配的胶呢?
我们actin的条件差不多是 10% 5% 的胶
80V到红带出来,转成120V,一直到样品跑到底。
  如果分子量180kd的话,  你的这个条件,电泳能出来,那胶的浓度是多少?
跟楼上一样? 转膜呢? ...

最大的跑过120的,这么大的没跑过,Actin我用的是12%的。
你可以试试5%,先跑个MARKER看看
15楼2010-12-24 14:08:03
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by neversaydi at 2010-12-08 10:33:22:



我一般都是湿转。
如果按照60 KD,我是80V 2H,转膜300mA 90min 的话,
  180KD大概是个什么条件呢?谢谢

80V 2H,转膜300mA 90min?和我们实验室的条件差别好大啊,我们是垂直电泳,80V 15min+200V45min,4度湿转转膜300mA 3h以上。
我们对於那份面向未来的勇气,过於渴求而被过去所迷惑
16楼2010-12-24 14:54:37
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