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neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shuaisuo1984 at 2010-12-14 11:01:13:
我们一般180KD的转膜是40v，3h，湿转，都能出来。希望对你有帮助~~~

恩  谢谢   电泳条件呢？也是80V ？多长时间呢？
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neverdaydie!
11楼2010-12-14 14:09:37
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abeywf

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-17 00:06:06
我们有做。分离胶8%，层积胶6%。60v、18min，120v、70min。
转膜的话，4℃，40v过夜（15h），因为是大蛋白，所以需要时间比较长，效果才好。如果两块胶一起转的话，需要50v。展示一下我的作品吧。
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12楼2010-12-16 21:01:39
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shagrace

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做的都是100V，1H，200mA，不管多大分子量，都出来了
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13楼2010-12-18 14:06:56
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neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shagrace at 2010-12-18 14:06:56:
我做的都是100V，1H，200mA，不管多大分子量，都出来了

那你们配的胶呢？
我们actin的条件差不多是 10% 5% 的胶
80V到红带出来，转成120V，一直到样品跑到底。
  如果分子量180kd的话，  你的这个条件，电泳能出来，那胶的浓度是多少？
跟楼上一样？ 转膜呢？
谢谢  回答。  我主要还是很菜，，，呵呵
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neverdaydie!
14楼2010-12-21 08:50:35
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shagrace

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by neversaydi at 2010-12-21 08:50:35:


那你们配的胶呢？
我们actin的条件差不多是 10% 5% 的胶
80V到红带出来，转成120V，一直到样品跑到底。
  如果分子量180kd的话，  你的这个条件，电泳能出来，那胶的浓度是多少？
跟楼上一样？ 转膜呢？ ...

最大的跑过120的，这么大的没跑过，Actin我用的是12%的。
你可以试试5%，先跑个MARKER看看
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15楼2010-12-24 14:08:03
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by neversaydi at 2010-12-08 10:33:22:



我一般都是湿转。
如果按照60 KD，我是80V 2H，转膜300mA 90min 的话，
  180KD大概是个什么条件呢？谢谢

80V 2H，转膜300mA 90min？和我们实验室的条件差别好大啊，我们是垂直电泳，80V 15min+200V45min,4度湿转转膜300mA 3h以上。
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我们对於那份面向未来的勇气，过於渴求而被过去所迷惑
16楼2010-12-24 14:54:37
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