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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】单酶切的步骤
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chen860729

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】单酶切的步骤 已有2人参与

求助单酶切的实验步骤，怎样避免自连？单酶切的反应体系是什么？
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1楼 2010-12-05 21:57:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看酶的说明书
怕自连就去磷酸化
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-05 22:05:50
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Biohydrogen

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-06 08:29:48
引用回帖:
Originally posted by chen860729 at 2010-12-05 21:57:11:
求助单酶切的实验步骤，怎样避免自连？单酶切的反应体系是什么？

如果连接片段有抗性选择的话不必怕自连，用抗性选择培养基就行了
否则的话需要将载体去磷酸化，用碱性磷酸激酶就行了
至于酶切的话，用相应的buffer，必要的时候加BSA后在相应的温度下保温相应的时间就行了
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-05 22:06:19
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