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新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】单酶切的步骤已有2人参与

求助单酶切的实验步骤，怎样避免自连？单酶切的反应体系是什么？

1楼 2010-12-05 21:57:11

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铁杆木虫 (职业作家)

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看酶的说明书
怕自连就去磷酸化

2楼2010-12-05 22:05:50

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金虫 (正式写手)

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dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-06 08:29:48

引用回帖:

Originally posted by chen860729 at 2010-12-05 21:57:11:
求助单酶切的实验步骤，怎样避免自连？单酶切的反应体系是什么？

如果连接片段有抗性选择的话不必怕自连，用抗性选择培养基就行了
否则的话需要将载体去磷酸化，用碱性磷酸激酶就行了
至于酶切的话，用相应的buffer，必要的时候加BSA后在相应的温度下保温相应的时间就行了

3楼2010-12-05 22:06:19

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