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惟我独尊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wyzl2007 at 2010-12-02 21:12:22:
DNA 加入量太大,还有DNA降解非常厉害!!!

你好 请问,如果是DNA降解了 那么是在PCR过程中降解的呢 还是最初的模板已经降解了呢
11楼2010-12-02 21:29:50
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YaYa785

银虫 (小有名气)

★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流!:tiger06: 2010-12-03 23:06:05
1.加样量大
2.dna降解了
3.电极液用的时间太长
12楼2010-12-03 14:42:10
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adslye

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-12-03 23:06:15
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-02 16:56:43:
DGGE割胶后提DNA,然后PCR ,跑琼脂糖就成这样了,大家帮忙分析一下是什么原因啊


酶的问题。
你是不是程序时间很长?普通酶的扩增效率高,保真性差。一旦PCR程序时间过长,就会出现这种产物满天的情况。换高保真酶。

还有,你回收的是PCR产物的话,要稀释后才行。50-1000倍。

如果不是这样。建议你吧你的PCR体系和程序发上来。大家一起看看。

[ Last edited by adslye on 2010-12-3 at 18:26 ]
13楼2010-12-03 18:19:48
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巴啦啦

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-02 16:56:43:
DGGE割胶后提DNA,然后PCR ,跑琼脂糖就成这样了,大家帮忙分析一下是什么原因啊


降解了吧?或者是不是跑胶时放入的电解液过少了?
14楼2010-12-03 19:04:35
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森林7631

铜虫 (小有名气)

降低模板量,
Time lost can not be recalled.
15楼2010-12-03 19:19:59
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-12-03 18:19:48:


酶的问题。
你是不是程序时间很长?普通酶的扩增效率高,保真性差。一旦PCR程序时间过长,就会出现这种产物满天的情况。换高保真酶。

还有,你回收的是PCR产物的话,要稀释后才行。50-1000倍。

如果不 ...

我的模板长度为200BP 引物为细菌V3区引物 341F和534R 程序如下: 94预变性 4 min ;94 变性1 min 55 退火 1 min  72延伸 1 min ,30 个循环 最后72 延伸 6分钟
16楼2010-12-03 20:20:52
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5):鼓励反馈 2010-12-04 10:45:21
引用回帖:
Originally posted by YaYa785 at 2010-12-03 14:42:10:
1.加样量大
2.dna降解了
3.电极液用的时间太长

1 后来做了一次 ,模板量降低了一倍(原来加4 微升 后来改成2微升)结果还是这样
2 讲解的话 是什么原因呢
3  电泳液是新配的
17楼2010-12-03 20:23:30
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wlwabcd

铜虫 (正式写手)

应该是模板浓度太大了
18楼2010-12-03 20:41:10
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wyzl2007 at 2010-12-02 21:12:22:
DNA 加入量太大,还有DNA降解非常厉害!!!

此为正解。
19楼2010-12-03 21:26:07
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feiye2214

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-02 16:56:43:
DGGE割胶后提DNA,然后PCR ,跑琼脂糖就成这样了,大家帮忙分析一下是什么原因啊


你从胶提纯DNA后没有跑胶鉴定?直接PCR?
20楼2010-12-03 21:41:22
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