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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家帮我看看我的琼脂糖图怎么这样啊
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wyzl2007 at 2010-12-02 21:12:22:
DNA 加入量太大，还有DNA降解非常厉害！！！

你好 请问，如果是ＤＮＡ降解了　那么是在ＰＣＲ过程中降解的呢　还是最初的模板已经降解了呢
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11楼2010-12-02 21:29:50
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YaYa785

银虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流！:tiger06: 2010-12-03 23:06:05
1.加样量大
2.dna降解了
3.电极液用的时间太长
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12楼2010-12-03 14:42:10
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-12-03 23:06:15
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-02 16:56:43:
DGGE割胶后提DNA，然后PCR ，跑琼脂糖就成这样了，大家帮忙分析一下是什么原因啊


酶的问题。
你是不是程序时间很长？普通酶的扩增效率高，保真性差。一旦PCR程序时间过长，就会出现这种产物满天的情况。换高保真酶。

还有，你回收的是PCR产物的话，要稀释后才行。50-1000倍。

如果不是这样。建议你吧你的PCR体系和程序发上来。大家一起看看。

[ Last edited by adslye on 2010-12-3 at 18:26 ]
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13楼2010-12-03 18:19:48
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巴啦啦

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-02 16:56:43:
DGGE割胶后提DNA，然后PCR ，跑琼脂糖就成这样了，大家帮忙分析一下是什么原因啊


降解了吧？或者是不是跑胶时放入的电解液过少了？
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14楼2010-12-03 19:04:35
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森林7631

铜虫 (小有名气)
降低模板量，
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Time lost can not be recalled.
15楼2010-12-03 19:19:59
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-12-03 18:19:48:


酶的问题。
你是不是程序时间很长？普通酶的扩增效率高，保真性差。一旦PCR程序时间过长，就会出现这种产物满天的情况。换高保真酶。

还有，你回收的是PCR产物的话，要稀释后才行。50-1000倍。

如果不 ...

我的模板长度为200BP 引物为细菌Ｖ３区引物　３４１Ｆ和５３４Ｒ　程序如下：　９４预变性　4　min ;94 变性1 min 55 退火 1 min  72延伸 1 min ，30 个循环 最后72 延伸 6分钟
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16楼2010-12-03 20:20:52
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5):鼓励反馈 2010-12-04 10:45:21
引用回帖:
Originally posted by YaYa785 at 2010-12-03 14:42:10:
1.加样量大
2.dna降解了
3.电极液用的时间太长

1 后来做了一次 ，模板量降低了一倍（原来加4 微升 后来改成2微升）结果还是这样
2 讲解的话 是什么原因呢
3  电泳液是新配的
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17楼2010-12-03 20:23:30
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wlwabcd

铜虫 (正式写手)
应该是模板浓度太大了
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18楼2010-12-03 20:41:10
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wyzl2007 at 2010-12-02 21:12:22:
DNA 加入量太大，还有DNA降解非常厉害！！！

此为正解。
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19楼2010-12-03 21:26:07
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feiye2214

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-02 16:56:43:
DGGE割胶后提DNA，然后PCR ，跑琼脂糖就成这样了，大家帮忙分析一下是什么原因啊


你从胶提纯DNA后没有跑胶鉴定？直接PCR？
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20楼2010-12-03 21:41:22
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