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adslye

银虫 (正式写手)


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Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-21 09:44:45:

我也经常扩出两边相同引物的条带,而且都和目的条带差不多,很悲剧,现在我都加上左右单引物对照,费点事,放点心

用热不对称PCR可以缓解这种现象不?不用随即引物,就是一对引物的退火给它有个差别,然后用热不对称的步骤P。 我现在就是烦这个,我设计的特异性引物不工作,总是另一条单引物起作用。我是酶切产物两边加上接头。用自己的引物和接头引物做巢扩。结果总是smear。
11楼2010-11-21 09:52:17
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

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Originally posted by adslye at 2010-11-21 09:52:17:


用热不对称PCR可以缓解这种现象不?不用随即引物,就是一对引物的退火给它有个差别,然后用热不对称的步骤P。 我现在就是烦这个,我设计的特异性引物不工作,总是另一条单引物起作用。我是酶切产物两边加上接 ...

我觉着TAIL体系条件也并不是很好把握;接头为什么两边加呢,那岂不是第一步特异性很差
12楼2010-11-21 10:51:32
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adslye

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-11-26 09:37:23
???????:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-21 10:51:32:

?????TAIL????????????????????????????????????????????????????

takara??kit?? TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit ??http://www.docin.com/p-1308436.h ... ????????????????

????~~??????????????????????????鷳????????
???????????????????7??????????????????????????PCR~??????д?????

???????PCR?????е???????????????inverse PCR???
13楼2010-11-21 11:04:54
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

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Originally posted by adslye at 2010-11-21 11:04:54:


takara的kit( TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit :[url]http://www.docin.com/p-1308436.html)就是那样设计的,但是接头的5‘端没有磷酸基团,因此理论上第一轮PCR接头引物无法工作。可是我的实验发现, ...

inverse也有过,而且都比较诡异
14楼2010-11-23 13:02:46
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


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用walking or RACE来做不行吗,为什么要做反向呢?
15楼2010-11-23 14:38:35
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

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Originally posted by linxi8579 at 2010-11-23 14:38:35:
用walking or RACE来做不行吗,为什么要做反向呢?

这个问题比较尴尬,因为这个基因我用RACE和TAIL都没做出来,所以想试试INVERSE
16楼2010-11-23 20:15:43
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


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Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-23 20:15:43:

这个问题比较尴尬,因为这个基因我用RACE和TAIL都没做出来,所以想试试INVERSE

你这个基因也太困惑了吧,反向太麻烦了。walking 不行啊,用韩国的seegene的,很好做的。你是什么材料
17楼2010-11-24 14:13:36
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

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Originally posted by linxi8579 at 2010-11-24 14:13:36:

你这个基因也太困惑了吧,反向太麻烦了。walking 不行啊,用韩国的seegene的,很好做的。你是什么材料

SEEGENE是公司还是方法?我做的是银杏,一个若有若无的基因....
18楼2010-11-24 16:07:59
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-24 16:07:59:

SEEGENE是公司还是方法?我做的是银杏,一个若有若无的基因....

是一个公司,他的walking试剂盒很好用的。你整一个若有若无的基因?挺玄的啊
19楼2010-11-26 08:48:04
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

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Originally posted by linxi8579 at 2010-11-26 08:48:04:

是一个公司,他的walking试剂盒很好用的。你整一个若有若无的基因?挺玄的啊

是啊,拿出来就是重大发现,拿不出来就是一个杯具....
20楼2010-11-26 10:00:21
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