应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题
222/3返回列表上一页123下一页
查看: 2142  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

adslye

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-21 09:44:45:

我也经常扩出两边相同引物的条带，而且都和目的条带差不多，很悲剧，现在我都加上左右单引物对照，费点事，放点心

用热不对称PCR可以缓解这种现象不？不用随即引物，就是一对引物的退火给它有个差别，然后用热不对称的步骤P。 我现在就是烦这个，我设计的特异性引物不工作，总是另一条单引物起作用。我是酶切产物两边加上接头。用自己的引物和接头引物做巢扩。结果总是smear。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2010-11-21 09:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-11-21 09:52:17:


用热不对称PCR可以缓解这种现象不？不用随即引物，就是一对引物的退火给它有个差别，然后用热不对称的步骤P。 我现在就是烦这个，我设计的特异性引物不工作，总是另一条单引物起作用。我是酶切产物两边加上接 ...

我觉着TAIL体系条件也并不是很好把握；接头为什么两边加呢，那岂不是第一步特异性很差
赞一下 回复此楼
12楼2010-11-21 10:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-11-26 09:37:23
???????:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-21 10:51:32:

?????TAIL????????????????????????????????????????????????????

takara??kit?? TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit ??http://www.docin.com/p-1308436.h ... ????????????????

????~~??????????????????????????鷳????????
???????????????????7??????????????????????????PCR~??????д?????

???????PCR?????е???????????????inverse PCR???
赞一下(2人) 回复此楼
13楼2010-11-21 11:04:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-11-21 11:04:54:


takara的kit（ TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit ：[url]http://www.docin.com/p-1308436.html）就是那样设计的，但是接头的5‘端没有磷酸基团，因此理论上第一轮PCR接头引物无法工作。可是我的实验发现， ...

inverse也有过，而且都比较诡异
赞一下 回复此楼
14楼2010-11-23 13:02:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用walking or RACE来做不行吗，为什么要做反向呢？
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2010-11-23 14:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-11-23 14:38:35:
用walking or RACE来做不行吗，为什么要做反向呢？

这个问题比较尴尬，因为这个基因我用RACE和TAIL都没做出来，所以想试试INVERSE
赞一下 回复此楼
16楼2010-11-23 20:15:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-23 20:15:43:

这个问题比较尴尬，因为这个基因我用RACE和TAIL都没做出来，所以想试试INVERSE

你这个基因也太困惑了吧，反向太麻烦了。walking 不行啊，用韩国的seegene的，很好做的。你是什么材料
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2010-11-24 14:13:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-11-24 14:13:36:

你这个基因也太困惑了吧，反向太麻烦了。walking 不行啊，用韩国的seegene的，很好做的。你是什么材料

SEEGENE是公司还是方法？我做的是银杏，一个若有若无的基因....
赞一下 回复此楼
18楼2010-11-24 16:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-11-24 16:07:59:

SEEGENE是公司还是方法？我做的是银杏，一个若有若无的基因....

是一个公司，他的walking试剂盒很好用的。你整一个若有若无的基因？挺玄的啊
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2010-11-26 08:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-11-26 08:48:04:

是一个公司，他的walking试剂盒很好用的。你整一个若有若无的基因？挺玄的啊

是啊，拿出来就是重大发现，拿不出来就是一个杯具....
赞一下 回复此楼
20楼2010-11-26 10:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lhwei1987 的主题更新
222/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭