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cambridge907金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助】细胞裂解方法
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最近在测定某种材料的转基因效率，用的是荧光素酶质粒，试剂盒是promega的E4530（1000次），在做细胞裂解时遇到了问题，请各位大虾指导，不甚感谢： 裂解时，直接采用试剂盒中的报告裂解缓冲液。为了达到裂解细胞的目的，所采取的两种方法分别是： 1. 将24孔板放在冰上，移液器反复吹打至少五分钟。结果：产生了很多小气泡，但是至少有50%的细胞一直贴壁，而且后期再怎么吹打这些细胞，它们都不愿下来； 2. 将培养板放到-20度冰箱结冰，然后室温（小于25度）溶解。结果：可以看到少量细胞漂浮，但是大部分细胞仍然贴壁。我只冻融了一次，是不是可以多冻融几次。 问题： 1. 经上述裂解处理后，在显微镜中看到的是不是只是细胞的残体（只是贴壁的细胞成分），而事实上细胞已经裂解了？ 2. 不知做过的XDJM是怎么做的呢？是否采用过细胞刮（cell scraper）？花在裂解这一步大概需要多长时间啊？ 谢谢各位的帮助！  |
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