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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR问题求解,2段基因连接

做PCR,用1上1下引物P出来一个基因,250bp,然后用2上2下p出另外一个基因,2500bp。现在我如何把这2个基因连接起来为模板继续p?
我的做法是把1下和2上这两个引物设计成有12个bp的互补,让他们p出来的2个基因可以有12个碱基的互补,然后再用1上和2下对这个互补的基因进行PCR,但是具体该如何设计呢?P一次,发现是引物2聚体的。。变性和退火温度是如何依据的?
请高手指点。。。
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2010-11-05 11:35:49:
没问题,先做吧。

已作,出来的是引物2聚体的条带
9楼2010-11-05 12:24:06
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段家一凡

木虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:41:11
12个bp太短了吧,你设计再长一点就好了。退火温度应该是已12bp为准。
2楼2010-11-05 00:28:36
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:41:22
参考SOE-PCR。
重叠部分可以长一点。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
3楼2010-11-05 01:10:22
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云泽紫樱

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-11-05 10:34:49
reasonspare(金币+2):谢谢分享。详细点更好。 2010-11-05 12:01:24
我设计的是互补18bp,融合了885bp的产物和1131bp的产物
“幸福”就是猫吃鱼,狗吃肉,奥特曼打小怪兽~
4楼2010-11-05 10:14:07
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