24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2229  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sayfxxk2u

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR问题求解,2段基因连接

做PCR,用1上1下引物P出来一个基因,250bp,然后用2上2下p出另外一个基因,2500bp。现在我如何把这2个基因连接起来为模板继续p?
我的做法是把1下和2上这两个引物设计成有12个bp的互补,让他们p出来的2个基因可以有12个碱基的互补,然后再用1上和2下对这个互补的基因进行PCR,但是具体该如何设计呢?P一次,发现是引物2聚体的。。变性和退火温度是如何依据的?
请高手指点。。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sayfxxk2u

新虫 (小有名气)


silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-05 11:41:38
引用回帖:
Originally posted by 云泽紫樱 at 2010-11-05 10:14:07:
我设计的是互补18bp,融合了885bp的产物和1131bp的产物

当时查的说12个bp就够了,所以设计了12bp的引物,如果这样,还得再设计引物,然后重新PCR 2个基因,再联合?
你的那个退火的温度和PCR策略是?
6楼2010-11-05 10:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

段家一凡

木虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:41:11
12个bp太短了吧,你设计再长一点就好了。退火温度应该是已12bp为准。
2楼2010-11-05 00:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:41:22
参考SOE-PCR。
重叠部分可以长一点。
生物资源交流QQ群:1044518333
3楼2010-11-05 01:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

云泽紫樱

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-11-05 10:34:49
reasonspare(金币+2):谢谢分享。详细点更好。 2010-11-05 12:01:24
我设计的是互补18bp,融合了885bp的产物和1131bp的产物
“幸福”就是猫吃鱼,狗吃肉,奥特曼打小怪兽~
4楼2010-11-05 10:14:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +3 木子念晞 2026-04-05 3/150 2026-04-05 14:13 by 255671
[考研] 材料调剂 +10 壹贰贰亿 2026-04-04 10/500 2026-04-05 13:59 by imissbao
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 367求调剂 +3 谢28 2026-03-30 3/150 2026-04-05 13:27 by huangmoli
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] 301求调剂 +18 骆驼男人 2026-04-02 18/900 2026-04-04 20:33 by 蓝云思雨
[考研] 359求调剂 +7 hhhhaaaa$ 2026-04-04 7/350 2026-04-04 18:49 by imissbao
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 315求调剂 +6 顺理成张 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:04 by 百灵童888
[考研] 抱歉 +5 田洪有 2026-03-30 5/250 2026-04-03 10:24 by linyelide
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 338求调剂,一志愿能源动力,外语是日语203 +5 zzz,,r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 求调剂推荐 +3 南山南@ 2026-04-01 3/150 2026-04-02 12:09 by xiaoranmu
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 070300化学279求调剂 +15 哈哈哈^_^ 2026-03-31 17/850 2026-04-01 21:37 by 给你你注意休息
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
信息提示
请填处理意见