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感谢‘齐二药’，为无辜献身者哀悼
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| 正是由于‘齐二药’这种舍己为国的精神，深深的震撼了整个国内的药品生产领域，使国家真正看到和认识到了药品生产和管理的现状，并由此痛下决心整顿生产领域，我们由此看到也许从此我们国家的药品生产环境会有一个根本的转变，虽然‘齐二药’事件本不该发生，事实上按照目前国内的生产和管理状况继续发展下去，这种事情是迟早要发生的，所以，我们应该感谢‘齐二药’，感谢‘齐二药’这种无知和无畏的牺牲精神。 |
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小小强
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2楼2006-05-26 22:58:20
3楼2006-05-26 23:03:09
2005版药典无菌检查法操作要点
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2005版药典无菌检查法操作要点 饶春意 一、无菌检查检验环境条件要求 无菌检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 二、培养基 1．培养基的灭菌 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。 2．培养基的保存 制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中一般可在一年内使用。（00版药典无叙述。） 3．培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。改良马丁培养基置23～28℃培养（00版药典为20～25℃）. 4． 养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 4.1无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支(瓶)，培养14天，应无菌生长。 4.2 灵敏度检查 菌种 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。传代次数不得超过5代 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤（或营养琼脂培养基）中，30～35℃培养18～24小时；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基（或改良马丁琼脂培养基）中，23～28℃培养24～48小时，上述培养物 用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于l00cfu(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml 0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每lml含孢子数小于l00cfu的孢子悬液。 培养基接种 每种菌株接种至2管相应的培养基，每管接种上述配制好的菌液1ml，另每种培养基取一支不接种菌液作空白对照，按规定温度时间培养。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌、生孢梭菌接种至硫乙醇酸盐流体培养基中在30～35℃培养3天；白色念珠菌、黑曲霉接种至改良马丁培养基中在23～28℃培养5天。 结果判断 空白对照管应无菌生长，每种菌株接种后的2管培养基管均生长良好，该培养基的灵敏度检查符合规定。 三、 稀释液、冲洗液及其制备方法 稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。 0.1％蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液 四、方法验证试验 当建立药品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该药品的无菌检查。若药品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计。确保在实际检验条件下，该供试品的无菌检查法的准确性、有效性和重现性。 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 1．菌种及菌液制备 同培养基灵敏度检查 2． 薄膜过滤法 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入试验菌（小于100cfu），过滤。取出滤膜接种至相应的培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一滤桶，不过滤供试品，其它操作同上，作为对照，将含培养基的容器按规定温度培养3～5天。各试验菌及相应的培养基逐一进行验证。 1 2 5 3 4 6 黑曲 3．直接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接人小于l00cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于l00cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接人规定量的供试品，另1管作为对照，按规定的温度培养3～5天。 4．结果判断 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查法和检验条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量，或增加培养基的用量，或使用中和剂，或更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证。 方法验证试验也可与供试品的无菌检查同时进行。 五、供试品的无菌检查 无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。进行供试品无菌检查时，所采用的检验方法和检验条件应与验证的方法相同。 检验数量与检验量 检验数量 批出厂产品和上市抽样样品的检验量规定有所不同。详见相应的列表。表1、表2、表3中最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量。一般情况下，供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加l/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接接种法，应增加供试品1支(或瓶)作阳性对照用。 检验量 每份培养基接种供试品的量按表2、表3规定。 阳性对照 应根据供试品特性选择阳性对照菌。供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。 表1 批出厂产品最少检验数量 供试品 批产量N(个) 每种培养基最少检验数量 注射剂 大体积注射剂（100ml） ≤100 100 10％或4个(取较多者) 10个 2％或20个(取较少者) 2％或10个(取较少者) 眼用及其他非注射产品 ≤200 >200 5％或2个(取较多者) 10个 桶装固体原料 ≤4 4 20％或4个容器(取较大者) 2％或10个容器(取较大者) 注：若每个容器中的装量不足接种两种培养基，那么表中的检验数量应加倍。 表2 上市抽验样品(液体制剂)的最少检验量 供试品装量V (ml ) 每支样品接入每管培养基的最少样品量 最少检验数量（瓶或支） 最少检验数量（不含阳性对照试验） 供试品检查（包括阳性对照试验） 薄膜过滤法 直接接种法 ≤1 1 20≤V<50 50≤V<100 50≤V<100（静脉给药） 100≤V<500 V≥500 全量 半量 2ml 5ml 10ml 半量 半量 500ml 20① 10 10 10 10 10 6 6 20+10 10+5 10+5 10+5 10+5 10+5 6+3 6+3 20+1 10+1 10+1 10+1 10+1 10+1 6+1 6+1 ①每种培养基各接种10支供试品。 表3 上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量 供试品装量M （瓶或支） 每支样品接入每管培养基的最少样品量 最少检验数量（瓶或支） 最少检验数量（不含阳性对照试验） 供试品检查（包括阳性对照试验） 薄膜过滤法 直接接种法 M<50mg 50mg≤M <300mg 300mg≤M <5g M≥5 g 一次性使用含药产品 全量 半量 150mg 500mg 整个产品 20① 10 10 10② 10 20+10 10+5 10+5 10+5 10+5 20+1 10+1 10+1 10+1 10+1 ①每种培养基各接种10支供试品。 ②桶装固体原料的最少检验数量为4个包装。 供试品处理及接种培养基 1．薄膜过滤法 薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也可使用一般薄膜过滤器。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。 水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为l00ml，且总冲洗量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。 水溶液供试品 取规定量，直接过滤，或混合至含适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，须用适量的冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数不得少于三次。冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将l00ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。如采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其剪成3等份，分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份做阳性对照用。 可溶于水的固体制剂供试品 非水溶性制剂供试品 可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油剂供试品 无菌气(喷)雾剂供试品 装有药物的注射器供试品 2．直接接种法 除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10％，同时硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于l0ml。培养基的用量和高度同方法验证试验；每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。 混悬液等非澄清水溶液供试品 固体制剂供试品 非水溶性制剂供试品 一次性使用含药产品供试品 培养 含硫乙醇酸盐流体培养基的容器于30～35℃、含改良马丁培养基的容器23～28℃均培养14天。 结果判断 供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。 供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。 除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果无效： (1) 无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求； (2) 回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素； (3) 阴性对照管有菌生长； （4）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。 试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。 |
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