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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】MBP融合蛋白的Amylose亲和层析
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xixi52517

铁虫 (初入文坛)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by 月月大可 at 2010-10-14 19:07:59
偶前一段时间试了一次MPB标签的纯化，相对于我以前使用的His标签它的结合能力确实有点低，但是纯化出来后确实很纯。
亲和层析很需要注意的一点是目的蛋白的量和层析填料使用的比例要适当。填料承载蛋白的量如果远远 ...

如何彻底清洗啊，我的mbp柱子比较脏啊
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11楼2013-04-22 11:18:23
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2010013814

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柱材清洗使用0.1%SDS浸泡就可以了，ＳＤＳ和蛋白质结合，就可以清洗掉柱子里的残留蛋白。ＳＤＳ属于弱碱，也不会对柱材强的损害。
这种情况，杂蛋白结合很多，特异性不强的的亲和柱。
１、上清与柱材４℃，搅拌孵育１.５ｈ，有利于结合。洗脱，再用ｌｙｓｉｓ　ｂｕｆｆｅｒ平衡柱子。
２、穿出收集，同１步骤再次过柱。
３.收集两次或三次这样的ｅｌｕｔｉｏｎ。
４.透析除掉ｍａｌｔｏｓｅ
５.ｅｌｕｔｉｏｎ与柱材孵育，同１，穿出大部分杂蛋白，洗脱的目的带就很纯了
６.酶切
７.过Ｑ柱（分开标签和目的蛋白），大多数蛋白带负电。在这里是很难除掉的。

ｐｓ：如果过ＳＰ阳离子交换柱，杂蛋白穿出。可省去透析再亲和的步骤。直接酶切ＳＰ柱就行了。
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暗物质
12楼2015-05-22 11:13:33
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