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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞传代时怎么都吹不下来啊!已有5人参与

细胞刚从上海中科院买回来的时候每次要消化5min左右)(0.25%的胰酶—0.02%EDTA),而且要吹很多,但是最后还是有一些(少部分)细胞吹不下来哦!
传代多次或复苏的细胞就越不容易消化了啊,细胞都已经变圆变亮了,但终止消化后吹打却有很大一部分细胞吹不下来啊!每次只有等消化至细胞脱落了60%—70%的时候再终止消化才能把细胞吹下来哦?但每次消化这么久对细胞液不好,所以也不是个办法,希望各位高手能指点一二哦!
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-10-11 10:30:44
richenim(金币+2): 2010-10-11 12:22:13
对于这种比较难消化的细胞,个人认为消化的时间长一点,问题不大。楼主考虑的对,消化时间过长,的确影响细胞的生长状态。但是,这种细胞的理化特性已经如此了,也只能忍了。如果你觉得大量胰酶+长时间的消化不好的话,可以尝试以下方法:PBS洗--加入适量胰酶37°消化至细胞之间有空隙(静下观察)----弃去可见的胰酶,残留在细胞间隙的剩余胰酶足够用来继续消化,当然,还是在37°中进行。预祝实验顺利
12楼2010-10-10 23:02:35
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

richenim(金币+1): 2010-10-09 12:07:20
这是什么细胞呢?有没有尝试更换下细胞瓶或其他培养条件试试,还是说这个细胞的特性就是如此呢?
52187644
2楼2010-10-09 12:04:26
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richenim

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-10-09 12:04:26:
这是什么细胞呢?有没有尝试更换下细胞瓶或其他培养条件试试,还是说这个细胞的特性就是如此呢?

是人前列腺癌细胞PC-3,尝试了更换培养瓶的啊,其他培养条件?是指什么?这个细胞确实是贴壁紧,不怎么好消化,但好像好不至于如此哦!
4楼2010-10-09 12:07:12
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

ATCC介绍是说要消化5-15min哦,不过没有使唤过这种细胞,没有发言权哦。
52187644
5楼2010-10-09 12:13:12
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