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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取遇到了问题
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cflikunlun87

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒提取遇到了问题 已有2人参与

求助：  1 我做的转化菌落PCR鉴定是阳性之后，挑菌提了质粒，但是跑电泳发现在15000bp以上很多有特别亮的一条带，而在15000bp只能看到淡淡的一条带，是不是把基因组DNA提出来了呢？如果是这样，是我用的溶液2失效了吗，如果不是，还有其它原因吗
        2 我还遇到了一个问题，就是质粒提取完之后立刻跑电泳显示7500bp左右，但三天之后因为做了个酶切想确定是否切开了又跑了电泳，结果发现原来的质粒带在15000bp左右了，是因为RNA被降解掉很多的原因吗   
         希望大家提出宝贵建议，谢谢！

本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2461255&pid=873250&page=1#pid873250
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1楼 2010-10-08 18:25:28
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-09 06:08:49
第一个问题，一般质粒有就行，提出总DNA很正常。
第二个问题，对照最好用以前提出的环状空质粒作对照。会有线性和环状的差异，但差别这么大确实少见。
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3楼2010-10-08 23:30:46
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virus2009

金虫 (正式写手)

人称 龙哥
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-08 23:16:41
建议：鉴定后再挑菌提质粒用试剂盒，大质粒普通法提取一般都会有两条带的（超螺旋的和开环的）。至于第二个问题我遇到的也不会像你那样相差那么大，另外，你跑环状质粒用marker不是很科学。线状的条带用marker能显示大小，环状的用marker不可信。
赞一下(2人) 回复此楼
virus
2楼2010-10-08 22:17:27
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