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cflikunlun87

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒提取遇到了问题 已有2人参与

求助:  1 我做的转化菌落PCR鉴定是阳性之后,挑菌提了质粒,但是跑电泳发现在15000bp以上很多有特别亮的一条带,而在15000bp只能看到淡淡的一条带,是不是把基因组DNA提出来了呢?如果是这样,是我用的溶液2失效了吗,如果不是,还有其它原因吗
        2 我还遇到了一个问题,就是质粒提取完之后立刻跑电泳显示7500bp左右,但三天之后因为做了个酶切想确定是否切开了又跑了电泳,结果发现原来的质粒带在15000bp左右了,是因为RNA被降解掉很多的原因吗   
         希望大家提出宝贵建议,谢谢!

本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2461255&pid=873250&page=1#pid873250
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virus2009

金虫 (正式写手)

人称 龙哥

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-08 23:16:41
建议:鉴定后再挑菌提质粒用试剂盒,大质粒普通法提取一般都会有两条带的(超螺旋的和开环的)。至于第二个问题我遇到的也不会像你那样相差那么大,另外,你跑环状质粒用marker不是很科学。线状的条带用marker能显示大小,环状的用marker不可信。
virus
2楼2010-10-08 22:17:27
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-09 06:08:49
第一个问题,一般质粒有就行,提出总DNA很正常。
第二个问题,对照最好用以前提出的环状空质粒作对照。会有线性和环状的差异,但差别这么大确实少见。
3楼2010-10-08 23:30:46
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