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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】镍柱纯化，洗不下来啊。。。
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kxxin66

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-07 23:06:31
平衡用的尿素浓度是多少？
同意楼上所说的用EDTA洗一下（10mM）的应该足够了，如果真是沉淀了就需要用NaOH处理了，然后再用200mM的NiCl重新挂镍。
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11楼2010-10-06 09:55:02
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
没做过包涵体，进来观摩下
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物必先腐而后虫生
12楼2010-10-06 13:41:01
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gdxinlan

禁虫 (正式写手)
dy_414(金币+2): 2010-10-06 21:35:26
本帖内容被屏蔽
13楼2010-10-06 17:56:05
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gdxinlan at 2010-10-06 17:56:05:


多半沉淀到柱子上了
洗脱还可以降低pH进行

我觉得很可能也是这样的~那大概需要怎样的pH呢？是不是意味着我应该缓缓冲盐呢？我现在用的是Tris-HCl系统，pH=8.0
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我坚信，rp是攒出来的
14楼2010-10-06 21:37:29
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
dy_414(金币+1): 2010-10-07 00:25:59
silicare(金币+1):高手 2010-10-08 12:18:15
楼主的溶液里有NaCl么？有的话是多少mM的呢，最好能将buffer贴出来，我怀疑可能是离子强度低的缘故。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
15楼2010-10-06 21:40:51
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-10-06 21:40:51:
楼主的溶液里有NaCl么？有的话是多少mM的呢，最好能将buffer贴出来，我怀疑可能是离子强度低的缘故。

NaCl确实没有，这个也可能考虑
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我坚信，rp是攒出来的
16楼2010-10-07 00:26:37
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lzwangjf

铁虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-07 23:06:48
dy_414(金币+2): 2010-10-09 14:29:23
如果EDTA不影响你后续试验的话，建议可以用低浓度的EDTA去洗。。要么就是加大咪唑的浓度，检查你咪唑的浓度和质量。。。
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17楼2010-10-07 19:36:55
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lzwangjf at 2010-10-07 19:36:55:
如果EDTA不影响你后续试验的话，建议可以用低浓度的EDTA去洗。。要么就是加大咪唑的浓度，检查你咪唑的浓度和质量。。。

好的，我周一就开始试
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我坚信，rp是攒出来的
18楼2010-10-09 14:29:35
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sophia_zhao

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dy_414(金币+9): 好吧，我试试 2011-08-23 16:00:11
柱料问题吧，lz试试新柱料吧
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19楼2011-08-23 15:52:19
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七海生物

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以试试加入0.1%TritonX-100；增加NaCl浓度，使用变性纯化。
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20楼2012-07-04 16:06:34
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