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zfy5956木虫 (著名写手)
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有关血细胞分析仪的若干问答
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有关血细胞分析仪的若干问答 1、目前临床使用的血细胞分析仪的工作原理有几种类型？哪种类型最普及？ 追溯血细胞分析仪的发展史，早在40年代末血细胞计数仪发明之初，其工作原理主要为光电法和电容法，到了50年代初，美国库尔特（Coulter）先生发明了电阻法原理，为此后血细胞分析仪的迅速发展奠定了基础，随着近几十年来现代科学技术的发展，血细胞分析仪的工作原理也从单纯的电阻法得到了突破性的进展，归纳起来，目前临床上使用的血细胞分析仪的工作原理有以下几种：（1）电阻法；（2）光散射法；（3）电阻法→激光；（4）电阻法→射频；（5）电阻法→激光→组织化学染色。 但目前在国内应用最多的是电阻法的仪器，因其具有结构简单、工作可靠、成本较低、功能不断完善等优点，此种仪器能正确地对白细胞进行三项分类，能满足一般血液检验的临床要求，因此也将是今后几年内我国广大医院血液常规检验的主流机型。其它融合了激光、射频、组织化学染色及流式细胞仪的部分原理的血细胞分析仪，虽然在白细胞的分类上得到了长足的发展（即便如此，仍不能完全取代人工显微镜检查），但采用了高精技术后，不仅结构复杂，而且成本大幅度上升，因此，售价非常昂贵。血红蛋白的测定则普遍采用比色法。 2、电阻法血细胞分析仪是怎样工作的？ 电阻法血细胞分析仪是基于血细胞是电的不良导体这一特性而制成的。下面是计数器的基本工作原理示意图： 激光成型的宝石微孔浸在经过稀释的标本中，在微孔的两边各有一个铂金电极，两极之间加有一定的电流（或电压），因稀释液具有导电性，则微孔之间有一定的电阻，当一个细胞进入微孔时，会排开等量的稀释液，因血细胞是电的不良导体，所以微孔之间的电阻就会发生变化，由此则会在电路上产生电压的变化，当血细胞通过微孔以后，电压又恢复到原来的水平，也就是说每当一个血细胞通过微孔时，就会在电路中产生一个脉冲，很显然，脉冲的个数与通过微孔的血细胞的数量相等，而脉冲幅度的大小则与血细胞体积的大小成正比。在检测器后面相应的电子电路对从微孔上检测到的脉冲信号进行放大、整形，然后，再经过甑别器、分频器和计数器，就可以分别得到RBC、PLT、WBC及WBC三项分类的计数值，最后乘上一定的比例因子后显示或打印出来的数值就是该标本的正确结果。而其他一些相关的参数则由仪器内的微电脑自动计算得到。 3、半自动血细胞分析仪或全自动血细胞分析仪的分析部分的关键部位是什么？ 在讨论这个问题之前，先澄清一下全自动与半自动血细胞分析仪其概念上的区别。所谓半自动是指标本需经手工预稀释，而全自动则有仪器对全血标本自动进行稀释，如果在全自动的仪器上再配上自动进样器，则可以实现真正全自动或曰无人化操作。显然，全自动仪器的分析部分与半自动仪器是一样的。 那么什么是分析部分的关键部位呢？假设仪器本身工作是正常的，血标本是混合均匀的，综合上面第二点中的叙述，我们知道，计数的结果与通过微孔的标本的体积（量）有直接关系，由此可见，如何控制计数系统精确取样就成为分析部分的主要问题，所以取样计量单位也就成为仪器的关键部分。 早期的计数方法是定时计数法，其基于的原理是在某一固定时间内，通过微孔的标本量是恒定的，所以检测的细胞数量能正确反映病人的实际情况。但该方法的测量结果受微孔的清洁程度、压力、时间的影响变化大，不易控制。为了提高结果的准确性，有的机器采用多次分段计数然后取其中较为接近的结果的平均值，但仍无法消除半堵孔造成的影响。 为了克服该计数方法所存在的问题，一些厂家将计数方法改进为定容测量，其基于的原理是取样单元具有固定体积，通过微孔的标本量是恒定的，所以检测的细胞数量能正确反应病人的实际情况，采用该技术后，测量结果与微孔的清洁程度、压力、时间基本无关，电子控制容易实现，保证测量准确性。但如果在计数过程中发生堵孔现象，而使计数时间过长，则会造成计数上的统计错误。因此，有些厂家又采用了定容测量，定时监控的技术，既保证了测量结果的真实性，又完全可以消除暂时堵孔和半堵孔造成的影响，并自动提示操作者发生了何种情况。是目前各种计数方法中较为理想的一种计数方法。 4、全自动血细胞分析仪的稀释部分的关键部位是什么？ 全自动血细胞分析仪是否具有良好的重复性和精确度，主要取决到于稀释时仪器对分血片的精确控制，由于分血方法会直接影响到分血精度，因此，分血部件亦即成为稀释部分的关键部位，也是衡量一台全自动分析仪稀释部分先进性、可靠性的关键部件。 纵观分血技术的发展，主要有三个阶段：由机械臂探针式发展为单旋转阀再发展为双旋转阀，其中旋转阀的使用是全自动血细胞分析仪分血技术的一大突破，而密封双旋转阀技术则是目前国际上最先进的并获国家专利的分血技术。 机械臂探针式分血技术由于其精度很难控制，且重复性差，故而在欧美国家已趋淘汰。 旋转阀技术的采用极大地提高了分血精度，但对采用单阀结构的血细胞分析仪来说，由于两次稀释均由一个阀来完成，且阀经常要旋转，故在使用中要减少阀的磨擦和解决阀的磨损问题，主要措施有两个：一是选用耐磨材料，但由于材料昂贵，增加了阀的成本；一是加润滑剂，由于阀不密封，而作为润滑剂的清洁液中含有盐的成分，挥发后会产生盐结晶，从而加剧阀表面的磨损，针对单旋转阀的上述缺陷，有的公司采用密封双旋转阀技术，由于阀是密封的，故而清洁液不会挥发结晶，大大减小了阀的磨损，又由于两次稀释分别由两个阀来完成，从而降低了阀的耐磨要求，使分血阀成本降低，而寿命却大大延长。也许您要问： 旋转阀磨损后会对检测结果产生什么样的影响呢？为什么对双旋转阀的材料要求比单旋转阀低而寿命反而增加了呢？ 下面给您作个具体分析： 机器经过长时间的使用以后，难免会在磨擦表面产生擦痕。比如机器在使用了三年以后，分血片的擦痕留下了0.1ul的全血，而0.1ul的全血在第一次稀释时几乎没有影响（0.1/30×100%=0.3%） 现在分两种情况进行讨论： （1）只用一个分血片，也就是说第二次稀释还是用同一个分血片。因为第一次稀释比为1:200，则第二次稀释的样本量相当于：（30-0.1）+0.1×200=29.2+20=49.9ul RBC、PLT等参数的计数结果就变为原来的166.3%(49.9/30×100%=166.3%) （2）如果使用独立的两个分血片，第一、二次稀释分别由两个分血片控制，则第二次稀释后RBC、PLT等参数的计数结果为原来的99.7%((30-0.1)/30×100%=99.7%) 由上可知,单阀只要有0.1ul的擦痕,就会使结果发生很大的变化。需要更新阀,而双阀仍可保持结果的精确,因此,密封双旋转阀不仅材料要比单阀要低,而且寿命反而增加。 在世界三大品牌血球分析仪厂家中，Sysmex是目前唯一将旋转阀技术应用于三分类产品中的厂家，Sysmex旋转阀选用的材质是太空陶瓷，耐磨且热膨胀系数小，定量准确，加之旋转阀截取中段血进行分析，所以目前三分类血球仪中，Sysmex的检测结果的精度是最好的。 5、有很多全自动血细胞分析仪均可同时采用静脉血很末梢血，但进样方式又不同，它们的区别到底在哪里？ 从目前市场上销售的各种全自动血细胞分析仪来看，仪器的进样方式主要有以下几类：①单进样口，只能用（静脉或末梢）全血。②单进样口，既可以使用全血又可使用预稀释末梢血。③双进样口，一个使用全血，一个使用预稀释液末梢血。 三类仪器使用静脉全血的方法大致相同，所不同的是末梢血进样。 第一类仪器只能采用全血，一般用静脉全血，如用末梢血，它要求操作者在病人手指上采50ul或更多的末梢血，且需滴入抗凝管中，由于采集的标本量较大，往往需操作人员挤压病人手指才能获得足够的用血量，这样就会将组织液和其他物质挤入标本中，并破坏部分红细胞，这不但会影响检测精度，还会堵塞微孔，造成检测失败，另外，抗凝管体积较小，使滴入管中的血液难以迅速和抗凝剂充分混合，如混合不匀，会引起血液凝集，造成检测不准或失败，甚至损坏仪器。 第二类仪器虽然只有一个进样口，但除使用静脉全血外，还可以使用预稀释末梢血，只是从使用静脉全血进样改为使用预稀释末梢血进样时，要在软件内进行选择，由于该类仪器只有一个定标系统，所以其全血与预稀释血标本测量结果的相关性会受影响，使其中一个血样（全血或预稀释血）的测量准确度会受较大影响。 第三类进样方式采用了双进样口技术，一个全血进样口采用抗凝静脉血，另一个进样口采用预末梢血进样，由仪器自动识别，由于仪器采用了双进样系统，故其静脉全血与预稀释末梢血标本的检测结果有较好的相关性，所以当全自动血细胞分析仪上同时使用静脉全血与预稀释血时只有最后一类仪器的检测结果比较可信。 |
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zfy5956
木虫 (著名写手)
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6、定标的概念是什么？ 一般来说，血细胞分析仪在初次安装和使用过程中，其检测结果会与血样实际值之间存在一个差值，为了使结果与实际相符合，须对有关参数确定一个修正值，这个确定修正值的过程是对仪器进行定标。 7、哪种血细胞分析仪有两个定标程序？静脉血和末梢血分别定标有是意义？ 目前市场上销售的仪器中，有的全自动血细胞分析仪有两个定标程序，即静脉血定标程序和末梢血定标程序，而仪器根据所进的样本是静脉血还是末梢血来自动选择不同的定标程序以校正测试结果。 众所周知，人的静脉血与末梢血是略有差异的，即使同一仪器对同一病人进行检测，其静脉血和末梢血的检测结果亦是有差别的，如果以静脉血检测结果作为基础，以实际值作为定标基准，这样虽然可以对静脉血精确定标，但用该定标标准测量末梢血时，会使结果出现较大误差，反之亦然。如分别以静脉血和末梢血的检测结果做为基础，以实际值作为定标基准，分别对静脉血和末梢血精确定标，使两者结果与实际值均非常符合，自然，两者的相关系数亦相当高，这样可避免临床上因两者检测结果的误差而造成对病人病情的误诊。如果有些医院对门诊病人采用末梢血诊断，对住院病人采用静脉诊断的话，该病人的前后检测结果亦同样具有较高的比较价值。 8、什么是浮动界标？浮动界标有什么好处？ 为便于识别，在RBC/PLT通道一般把体积大于30fl的细胞计为红细胞（RBC），而把体积小于30fl的细胞计为血小板（PLT）。一般的血细胞分析仪，PLT和RBC的分界点是固定的（例如30fl处），这种情况属于固定界标。但也有例外的情况，有些公司的血细胞分析仪，可以把PLT和RBC的分界点人为地设置在5～30fl的范围内，在实测样本时，根据PLT和RBC的分布曲线，自动在所设定的范围内寻找最低点，以得到正确的PLT、RBC及相关参数的结果，这就是浮动界标。 那么浮动界标到底有什么优点呢？请看下面一个例子： 对于一般的人来说，RBC的体积通常大于30fl，但对于小红细胞症患来说，则可能会有相当一部分的RBC体积小于30fl，如上图所示。图1所示为固定界标的情况，很显然，非但病人PLT、RBC的实际数量与测量值不会一致，而且与PLT、RBC相关参数如MPV、PCT、PDW、MCV、HCT、RDW、MCH、MCHO等参数也不可能正确反映病人的实际情况；图2所示为浮动界标的情况，假设浮动范围设定在10fl～30fl之内，仪器根据病人的实际情况自动寻找PLT、RBC分布曲线的最低点，可能为20fl处。这样不但可以得到正确的PLT、RBC结果，而且所有与PLT、RBC相关的参数均能直接反映病人的实际情况。仪器对该类情况的自动正确处理是浮动界标的一大优点。 另外，具有浮动界标的仪器可以做其它动物的血细胞分析，因为不同的动物，PLT及RBC的分界点往往不同的，所以除具有浮动界标外的仪器是不可能对其进行血细胞分析的。 9、全自动血细胞分析仪是怎样清洗吸样针的？ 大家知道，对于全自动血细胞分析仪来说，通过吸样针吸取的样本为全血，它与预稀释血对比具有浓度高，粘滞性大的特点，所以吸过一次样本后，残留在管路内外的血迹不容易被吸走，如果不经过必要的清洗，势必会大大增加互染率，影响下一个样本的结果。 清洗方式有二种：一种是只清洗管路内部及样针的内侧，吸样针的外表面需要操作者手工拿棉花或纸张擦干净，这样存在二个问题：一是操作者有可能接触到病人血液，容易被感染；二是挂在吸样针上的纤维丝及碎屑等细小东西容易被吸入管道，严重时可能会堵塞管路及微孔，造成不必要的损失。所以后来的一些仪器上就设计了另一种清洗方式，即管路内部及吸样针内外表面同时自动清洗，这样不但提高了自动化程度，而且从根本上解决了上述提到的二个问题。 10、什么是待机状态？自动待机有什么好处？ 如果仪器在使用过程中，在某一设定时间内，操作者对分析仪未执行任何操作，则仪器的屏幕变暗，真空泵停止工作，所有电磁阀处于放松状态，但此时只要操作者按（MENU）键，仪器又恢复至工作状态，对于处于上述状态中的仪器称为处于待机状态。 仪器自动待机即可减轻真空泵工作负荷，减少管路老化，延长电磁阀寿命，保护荧光屏，从而延长仪器使用寿命，又可使仪器快速恢复工作，从而提高工作效率。 11、什么是关机自动清洗？关机自动清洗有什么好处？ 仪器在工作状态时，整个管路系统充盈着等渗稀释液，关机时，仪器自动用纯净蒸馏水替换管路等渗稀释液，待该替换程序结束后，再自动关闭电源的过程称为关机自动清洗。 由于等渗稀释液的主要成分是水和NaCl，而管路普通采用硅胶管，如仪器在一定时间内不使用，稀释液中的水分会通过硅胶管挥发。使管路内产生盐结晶，该结晶造成的危害轻者会使出现结晶的管路报废，重者会使整个管路系统报废，从而使仪器不能正常工作。如实行关机自动清洗，仪器结束工作后，用纯净蒸馏水替换稀释液，这样，即使水份挥发后，亦不会留下任何结晶，对管路起到了很好的保护作能够该用。现在有许多仪器采用专用的清洗剂，还能起到祛除蛋白的作用。因此，关机自动清洗程序应该是血细胞分析仪应具备的基本功能之一，但遗憾的是目前许多仪器尚无此功能，给仪器的维护和保养造成很大麻烦。 12、血细胞分析仪怎样排除微孔堵塞？ 血细胞分析仪能否有效排除微孔堵塞是广大血细胞分析仪使用者较为关注的一个问题，针对不同类型的计数微孔目前有二种较为先进的排堵技术。 对于开放式微孔，当仪器检测到堵孔现象（计数时间HIGH）时，自动产生一高压细束稀释液流对微孔进行反冲，一般均可排除堵孔，如仍有堵塞，可按反冲（RINSE）键，人为产生一高压细束液流，进行反冲，或或用3%～5%次氯酸钠溶液浸泡微孔，这样处理后，可完全排除或溶解堵住微孔的细胞团或蛋白质。 对于封闭式微孔，采用电子清洁（亦称电子灼烧）技术，当一次计数结束后，仪器自动在两电极间加一较高电压，从而使孔间电流急剧加大，孔间稀释液沸腾，产生气泡，气泡不断地由小到大直至破裂，起到了空气锤作用，再通过稀释液带走被气泡冲击下来的碎屑等杂物，使微孔得到充分清洁，从而有效地解决了堵孔问题。 13、自动计算样本SD、CV值功能有何作用？ 一台高性能的仪器加上一套优秀的软件，极大地方便了用户的使用及维护。自动计算样本SD、CV值功能即是如此，它主要有下列二个作用： 一是为仪器的质控定标提供了很大的方便，当用户需要做质控或定标时，对某一样本（质控品或标准液）做若干次测试之后，仅需在键盘上选择软件的某几项，就可以得到所以参数（可多至18项）的平均值及S/CV值，而无需人工进行计算。 二是通过此功能计算每天所有样本的平均值，特别是MCHC平均值可起到简易质控的作用。MCHC=HGB/HCT=HGB/（RBC×MCV），HGB是由白细胞通过测量得到，而RBC及MCV则由红细胞通道测量得到，如果某一通道失调或工作不正常，则显然MCHC值将会产生偏离，只有当两个通道均正常或同时偏高（低），才有可能使MCHC值基本保持稳定，但两个通道同时偏高（低）的可能性是很小的，所以我们可以认为，当MCHC值基本保持稳定时，如果仪器原来是经过正常校正的，那么现在仪器的工作是正常的。由上面可以看到，当MCHC值在320g/L～360g/L范围之内，而且连续数天基本稳定时，则可以认为仪器的定标及工作是正常的；反之，如果连续数天的MCHC平均值超过上述范围，且变化较大，则此时仪器需要重新定标或校正。（编者注：Bull浮动均值（X＋S）为MCV89.5＋1.5fl,MCV30.5＋0.5pg,MCHC340＋5g/L） 14、PLT、RBC、WBC分布直方图有何作用？在临床上有无意义？ 目前，18参数的血细胞分析仪除了具有18项参数的数值结果之外，一般都还有PLT、RBC和WBC的分布直方图。那么这些直方图到底什么作用呢？确切地说这些直方图是供检验人员参考，以便判断18项参数的数值结果是否全部正确，如果从直方图上明显看出结果是不正确的话，则必须对样本进行重新分析（可能包括重新采取血样）只有等到正确结果后才能出报告。所以PLT、RBC和WBC分布直方图在临床上并无显著的意义，只是在检验人员判断结果的可信度时起到辅助的作用。 下面看几个例子： （1）对于WBC的直方图 如果得到图a所示的直方图，则说明溶血剂及溶血时间掌握得较好，结果比较符合实际，如是图b所示的直方图，则说明样本溶血不够是由于溶血剂用量太少，溶血剂溶血时间过短，实验室温度太低等因素造成，此结果将是不符合实际的，比如WBC总数偏高及百分比偏高等；若直方图为图c所示，溶血过量，情况与图b正好相反，严重时导致分类由三分类变为二分类甚至不分类。 （2）对于PLT直方图 图a所示为PLT正常分布直方图，图b、图c则显示电源有干扰，如地线没接好，此时与PLT相关的参数结果将是不可信的。 （3）对于PLT和RBC直方图 图a所示为正常情况；图b所示则说明此病人患有小红细胞症，对于不具备“浮动界标”功能的仪器，不能正确地分析此类病人的样本，必须进行显微镜检查；图c所示则说明电源有干扰或者是样本处理不当（或放置时间过久），致使部分白细胞凝集，而影响PLT相关的参数。 严格地说，凡碰到不十分可信的情况，不能随便向临床出报告，而应该重新分析样本或用显微镜检查。 15、什么是故障自诊断功能？故障自诊断功能有何作用？ 当出现故障时，仪器能“自己诊断”故障情况，给出代码号，它一般是通过软件来实现的。其优点是利于维修人员迅速正确判断故障情况，简单情况还可以由用户自己解决：这样可以有效地保证仪器的完好率，提高仪器的开机率，减少正常工作的影响。 16、影响血细胞分析仪检测的因素有哪些？ 血细胞分析仪所测出的细胞大小及数目实际上是电压脉冲的大小及数目，因此，所以影响脉冲大小及数目的因素都会对分析仪的检测产生影响，这中间主要有仪器本身及试剂方面和环境因素方面。 仪器本身及试剂方面归纳起来有下列因素：仪器设定的阀电压的大小，微孔电流的大小，前级放 |
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