用哪个种子表达的？

月常圆人长久

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祝福一下一切都会过去的困难总会过去的

32楼2010-09-14 16:42:02

wangqk198738

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用哪个种子表达的？

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借鉴一下，我也想学习一下，真核表达。正在做抗体呢。

33楼2010-09-14 18:01:34

Lee_Py

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虽然我对着方面不懂但是依然来顶贴也许多重复几次就能查出原因了希望能早日查出原因祝实验顺利

34楼2010-09-14 21:11:54

贺兰10

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啥也不说，祝福！
另，也许是选用的试剂问题，换换试试？

35楼2010-09-14 22:18:57

月月大可

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我用大肠杆菌表达的整合蛋白，活性杠杠的。虽然有一堆包涵体产生，但是上清中的量巨大，并且活性非常好。

建议多尝试，多数情况下表达的蛋白都还是有活性的。能不能测试刚刚破碎的菌体时候有没有活性，是不是在蛋白的纯化过程中搞失活了。如果是这样可以在4度下作，同时加入甘油。

同时检测酶发挥活性的buffer 离子强度 pH EDTA DTT（β-ME）等各种可能影响酶活性的因素时候考虑到！

老婆实验你还这么操心，呵呵祝福！

36楼2010-09-15 13:17:47

yuncheng

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祝福楼主！

追梦的天使~

37楼2010-09-15 13:40:15

heismeng

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38楼2010-09-15 15:10:35

lm_bob

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引用回帖:

Originally posted by heismeng at 2010-09-15 15:10:35:
这个我觉得让你老婆发帖子岂不是更明白
实验过程一点都没描述清楚没人能帮你吧
首先检讨你的活性评价体系，是否有文献报道，是否真实
然后你的plasmid表达前应该再次测序确认
纯化过程中可以加Glycerol
...

请问一下是纯化时的缓冲体系中就加glycerol吗，还是纯化完了再加

赞一下

39楼2010-09-16 17:10:52

heismeng

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引用回帖:

Originally posted by lm_bob at 2010-09-16 17:10:52:

请问一下是纯化时的缓冲体系中就加glycerol吗，还是纯化完了再加

纯化时的buffer 然后纯化完了做WESTERN或者SDSPAGE了没

别根本没得到蛋白

40楼2010-09-16 17:47:38