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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
祝福祝福!
31楼2010-09-14 16:40:45
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月常圆人长久

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
祝福一下 一切都会过去的 困难总会过去的
32楼2010-09-14 16:42:02
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

用哪个种子表达的?


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
借鉴一下,我也想学习一下,真核表达。正在做抗体呢。
33楼2010-09-14 18:01:34
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Lee_Py

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
虽然 我对着方面不懂 但是依然来顶贴 也许多重复几次就能查出原因了 希望能早日查出原因 祝实验顺利
34楼2010-09-14 21:11:54
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贺兰10

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
啥也不说,祝福!
另,也许是选用的试剂问题,换换试试?
35楼2010-09-14 22:18:57
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我用大肠杆菌表达的整合蛋白,活性杠杠的。虽然有一堆包涵体产生,但是上清中的量巨大,并且活性非常好。

建议多尝试,多数情况下表达的蛋白都还是有活性的。 能不能测试刚刚破碎的菌体时候有没有活性,是不是在蛋白的纯化过程中搞失活了。如果是这样可以在4度下作,同时加入甘油。

同时检测酶发挥活性的buffer   离子强度  pH   EDTA   DTT(β-ME) 等各种可能影响酶活性的因素时候考虑到!

老婆实验你还这么操心,呵呵  祝福!
36楼2010-09-15 13:17:47
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yuncheng

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
祝福楼主!
追梦的天使~
37楼2010-09-15 13:40:15
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heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
内容已删除
38楼2010-09-15 15:10:35
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lm_bob

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by heismeng at 2010-09-15 15:10:35:
这个 我觉得让你老婆发帖子岂不是更明白
实验过程一点都没描述清楚 没人能帮你吧
首先检讨你的活性评价体系,是否有文献报道,是否真实
然后你的plasmid表达前应该再次测序确认
纯化过程中可以加Glycerol
...

请问一下是纯化时的缓冲体系中就加glycerol吗,还是纯化完了再加
39楼2010-09-16 17:10:52
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heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lm_bob at 2010-09-16 17:10:52:

请问一下是纯化时的缓冲体系中就加glycerol吗,还是纯化完了再加

纯化时的buffer 然后纯化完了做WESTERN或者SDSPAGE了没

别根本没得到蛋白
40楼2010-09-16 17:47:38
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