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lm_bob

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】老婆实验表达的真核蛋白没有活性,无比郁闷,祈求建议和祝福已有14人参与

辛辛苦苦表达的真核蛋白没有活性,无比郁闷,纯化后测定没有活性,有啥方法?重来?
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我用大肠杆菌表达的整合蛋白,活性杠杠的。虽然有一堆包涵体产生,但是上清中的量巨大,并且活性非常好。

建议多尝试,多数情况下表达的蛋白都还是有活性的。 能不能测试刚刚破碎的菌体时候有没有活性,是不是在蛋白的纯化过程中搞失活了。如果是这样可以在4度下作,同时加入甘油。

同时检测酶发挥活性的buffer   离子强度  pH   EDTA   DTT(β-ME) 等各种可能影响酶活性的因素时候考虑到!

老婆实验你还这么操心,呵呵  祝福!
36楼2010-09-15 13:17:47
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三妹妹

金虫 (小有名气)


lm_bob(金币+1):谢谢参与
没有活性有很多种可能的,也不一定就要从来的吧。同期待高人给予指点。
祝福楼主和楼主老婆,实验总会顺起来的:)
2楼2010-09-14 08:46:20
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mukondo

木虫 (正式写手)


lm_bob(金币+1):谢谢参与
顶一下,希望牛人为你解答
4楼2010-09-14 08:57:06
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橙恋木

木虫 (著名写手)


lm_bob(金币+1):谢谢参与
祝福楼主lp好运早日到来!
天天都是天蓝蓝
7楼2010-09-14 09:06:18
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