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lm_bob

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】老婆实验表达的真核蛋白没有活性，无比郁闷，祈求建议和祝福已有14人参与

辛辛苦苦表达的真核蛋白没有活性，无比郁闷，纯化后测定没有活性，有啥方法？重来？

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1楼 2010-09-14 08:38:26

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月月大可

木虫 (著名写手)

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专业: 生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

我用大肠杆菌表达的整合蛋白，活性杠杠的。虽然有一堆包涵体产生，但是上清中的量巨大，并且活性非常好。

建议多尝试，多数情况下表达的蛋白都还是有活性的。能不能测试刚刚破碎的菌体时候有没有活性，是不是在蛋白的纯化过程中搞失活了。如果是这样可以在4度下作，同时加入甘油。

同时检测酶发挥活性的buffer 离子强度 pH EDTA DTT（β-ME）等各种可能影响酶活性的因素时候考虑到！

老婆实验你还这么操心，呵呵祝福！