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gaoshandian1金虫 (小有名气)
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原位杂交组织化学常用试剂及处理2
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三）硅化 【方法１】（1）将一扎新的盖玻片散开，在通风条件下于0.1mol/L的HCI中煮20min,等其冷却后,倒掉盐酸。 （2）用去离子水沉漂洗玻片，竖放在架子上自然干燥。 （3）硅化盖玻片：通风条件下，将单块的盖玻片在二甲二氯硅浣（dimethyldichorsilane,DMDC）液中浸几下，竖入在架子上干燥。 （4）收集干燥的盖玻片于一可耐热的petri氏盘（或培养皿）中，用去离子水漂洗数次，彻底清洗。 （5）用铝箔将装有盖玻片的培养皿包好，于180℃烘烤4h过夜。取出待冷至室温后，即可进行后续处理。 附：2%DMDC 配制：按比例两者充分混匀，静止待气泡消失即可使用。 用途：硅化玻片（载片、盖片均可）。 【方法2】将经过洗净的玻璃盖片分散开放在一金属网中，并将该网放入一接有真空泵的干燥器中。同时，在干燥器中放一盛有约1m二甲二氯硅浣（dimethyldiorosilane,DMDC）的小烧杯。盖好干燥器（确保密闭），抽真空约5min，然后让空气冲入。取出盛有盖片的金属网架，用锡箔纸包埋，于250℃以上烘烤4h以上，最好过夜。冷却后备用。 本法可用于玻璃及塑料器皿的硅化。塑料器皿只能于60℃烧干。 【方法3】APES（氨丙基三乙氧基硅浣）法 【方法4】 （1）49ml氯仿与1mg二甲二氯硅浣（DMDC）配液； （2）倒入每个拟硅化的试管或离心管中，浸泡5min后用乙醇或重蒸水冲洗； （3）玻璃器皿使用前位于180℃以上烘烤2h以上，塑料器皿应于60℃烘烤过夜。 注意：DMDC有毒且高度挥发，应于通风环境操作并戴口罩、手套，避免接触皮肤或吸入。 |
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2楼2006-05-04 10:04:51