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【求助/交流】请教一个克隆的问题,很棘手!已有4人参与
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| 最近在做一个克隆,一端是pmeI酶切,一端是EcoRI酶切,片段是300bp,载体大小是4.3kb左右,我将片段TA克隆后再用两个酶分别单酶切,单酶切时间尝试过4-5h,9-10h两种,中间用乙醇沉淀浓缩后换另一个酶切相同的时间后割胶回收连接,也尝试了用这两个酶一切做双酶切过夜后割胶回收连接,长出来的转化子提取质粒进行酶切验证,要么就是条带不对,要么就是空载,已经重复做了很多次,很是郁闷,请教这里的高手指点一下,盼回复了,谢谢! |
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glidingwater
银虫 (小有名气)
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3楼2010-09-07 08:34:17

2楼2010-09-07 08:27:16
ottolzm
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4楼2010-09-07 08:35:26
zhwenxing
木虫 (著名写手)
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5楼2010-09-07 09:48:36













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