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luyaqing16

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何稀释亚油酸

现在做测定酶活的实验,测定的酶为脂肪氧合酶,测定时需要用到0.25%的亚油酸作为底物。可查了下似乎没有0.25%的亚油酸,请教各位是应该稀释亚油酸到0.25%么,或是别的方法?谢谢各位
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

luyaqing16(金币+2):谢谢你的参与,现在的问题是,我该如何配制0.25%的亚油酸? 2010-08-31 21:44:52
引用回帖:
Originally posted by luyaqing16 at 2010-08-31 08:58:52:
现在做测定酶活的实验,测定的酶为脂肪氧合酶,测定时需要用到0.25%的亚油酸作为底物。可查了下似乎没有0.25%的亚油酸,请教各位是应该稀释亚油酸到0.25%么,或是别的方法?谢谢各位

应该是将 亚油酸配成0.25%浓度使用吧。
52187644
2楼2010-08-31 15:04:20
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yunbfly

木虫 (小有名气)

★ ★
silicare(金币+2):谢谢交流 2010-08-31 18:05:14
luyaqing16(金币+4):嗯,对现在我的问题也是该用何种溶剂稀释亚油酸? 2010-08-31 21:46:14
脂肪酸和油脂是不溶于水的,所以做酶反应可能是将酶反应缓冲液和脂肪酸混合做成乳状液。我估计你这个0.25%可能是亚油酸在乳状缓冲液里的浓度。
另:如果你一定需要0.25%的亚油酸溶液,用乙醚、石油醚、正己烷等有机溶剂稀释。但我估计这些溶液不是拿来做没活力测定的
3楼2010-08-31 15:30:00
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luyaqing16

金虫 (小有名气)

整个的反应体系是这样的:我先从植物组织中提取粗酶液(脂肪氧合酶),然后与Tris-盐酸溶液混合于液相氧电极里,保持5-10min。再加入0.25%的亚油酸作为底物。这个0.25%的亚油酸我该用何种溶剂去稀释它呢
4楼2010-08-31 21:55:53
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yunbfly

木虫 (小有名气)


silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-01 08:32:02
luyaqing16(金币+5): 2010-09-01 09:02:02
首先,你的0.25%应该是反应体系中的亚油酸浓度。所以你不需要管用什么做成0.25%的亚油酸溶液。
第二,你的反应体系应该是一个酶反应缓冲液+亚油酸的水包油的乳状液体系,所以你要考虑的是如何将亚油酸做成乳状液
第三,查脂肪氧合酶测定相关文献,应该可以找到相关的乳化剂。将所有东西按比例加进去,振荡后就应该是乳状液的缓冲反应液了。
5楼2010-09-01 08:26:27
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js1186097865

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是用亚油酸测Lox活性,我用吐温20和硼酸盐缓冲液来溶解亚油酸,得到的是乳浊液,可是用来测定酶活时,吸光度呈负数(原理就是随着反应的进行吸光度随产物量的增加而增加),请高人赐教,

发自小木虫Android客户端
6楼2017-09-09 19:55:34
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匿名

用户注销 (初入文坛)

本帖仅楼主可见
7楼2017-09-29 10:00:31
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