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【转贴】欧洲现在对于发酵产品的特别要求，针对菌种问题，残留问题等（搜无重复）
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欧洲现在对于发酵产品有些特别的要求，主要是菌种问题，残留问题等。 这个条目下包括可基因理论药物，和非传统发酵药物，与传统发酵药物，现在对于传统发酵药物按照基因药物的某些要求管理确实有些难度。 人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则(摘) （二）细胞库及工程菌库的建立和检定 包括包装和繁殖重组病毒的细胞库和扩增重组质粒的工程菌库。必须建立三级库，即原始细胞库（Primary Seed Bank）、种子细胞库（Master Cell Bank）和工作细胞库（Working Cell bank）；或原始工程菌库、种子工程菌库和工作工程菌库。 1．细胞库 （1）原始细胞库 需说明来源、代数、细胞特性及有关档案资料。对主细胞库和工作细胞库需详细说明建库过程，包括材料、方法、步骤、细胞库存的数量和登记档案等。 （2）主细胞库 主细胞库由原始细胞库直接传代建立或通过亚克隆方法筛选后建立。应明确使用代次。 （3）工作细胞库 工作细胞库由主细胞库传代建立。应明确工作细胞库的使用代次。 （4）细胞库检定 ①主细胞库或工作细胞库检定应依据《生物制品生产用细胞的制备及检定规程》的要求进行。 ②病毒转导效率和病毒的产量等的检定 ③导入基因的存在状态，稳定性及其表达水平的检测 ④复制型病毒的检测 若需用其它辅助病毒，须说明其来源、分离的方法步骤和传代次数等。 2．工程菌库 工程菌主种子库和工作种子库的建立和检测应按现行《中国药典》相关要求建立。 （1）工程菌主种子库的检定 ①菌种同一性鉴定：菌种/株的来源、基因型及表型。基因型通过RAPD方法鉴定，通过测定重组质粒 的特殊标记和抗药性标记确定表型。 ②菌种培养纯度检定：外源因子（如杂菌、真菌、噬菌体等）的检测。 ③菌种稳定性检定：转化菌的比例，扩增条件、质粒拷贝数，基因表达量、允许的传代次数。 ④基因表达盒序列分析：插入的目的片段以及调控序列进行测序分析。 （2）工程菌工作种子库的检定 除外基因表达盒序列分析，其它检定内容按上述工程菌主种子细胞库的检定。 菌种问题 菌种的问题实际上是一个菌种鉴定的问题。 1) 菌种的来源(分离来源，和购买来源)，这个资料比较好搞。 2) 鉴定，包括宏观和微观，代谢特征(这些资料也基本上有)，基因(有些可能要基因序列，我认为可能有些过分，仅仅需要基因表现型)，这个问题也比较好解决(在基因研究部门) 3)谱系，包括标准名称，以及传代过程等。 细胞库问题 这个问题主要是对主细胞库，可工作细胞库进行管理的问题。 这些资料一般都有，但可能不规范。 主要问题可能是细胞库中菌种纯度问题，是否带有其它菌和病毒。 发酵工艺问题 主要是要考虑发酵工艺中杂质是否对后续工艺有影响问题。 如果我没有记错的话，如一种产黄青霉菌，所产生的色素在提炼中比较难除去。 在这主要要讨论工艺是多好，能保证产品质量。 残留蛋白质与核酸 这个问题是现在EDQM关注的主要问题，许多公司在这个问题上没有办法回复。 解决这个问题的关键是产品在蛋白质和核酸220nm，240nm是否有吸收。 1)如果没有吸收就可以直接测定。 2)如果有吸收要通过膜的方法，将残留蛋白质与核酸富集，然后测定。 千万不要到食品所去，他们用凯氏定氮的方法，什么也作不出来。可以考虑用考马斯亮蓝的方法。 [ Last edited by 小小强 on 2006-5-19 at 09:41 ] |
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