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12zhangwei

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】胶体几丁质的制备过程分享 已有12人参与

最近检测菌几丁质酶的产生,要配置胶体几丁质,看文献后,用下面的方法:
    2克几丁质(粉末)用预冷的浓盐酸45mL溶解,在磁力搅拌器上搅拌好,此时成黄色。搅拌2小时后,放入冰箱4摄氏度,静置24h。将盐酸混合液加入到300毫升的50%的酒精(预冷好的),搅拌2小时,此时为不透明的乳白色溶液,4000转离心20分钟,看到乳白色沉淀,,用蒸馏水反复洗,这里提一下,文献上都说用大量的蒸馏水冲洗,如果把沉淀收集起来的,用水冲洗,沉淀会被冲走的,损失很多,所以我做的时候,在离心管中加水,搅拌,离心。这个过程挺长的,最后离心的上清大约PH到6.5,我没在接着洗了,用水重悬沉淀,收集好后,直接定容到200mL.
       不过配好灭菌后,测了一下ph,为6.975.但是放置一会发现乳白色的悬浮物沉淀下来了,出现分层。
        而且配置0.5%的胶体几丁质培养基时,倒完平板,觉得还是可以看到颗粒的,感觉分散的不是很好。
      顺便提一下,第一次配置时,没有用50%的酒精,而是直接导入冷蒸馏水里面,水洗后ph4.0,灭菌后ph5点几,但那次倒完平板后看不到颗粒状物质,就是均一的分布的乳白色不透明的感觉,不过遇到的问题是,水洗到ph4.0后,在继续水洗的时候,离心效果不好,上清已经有点浑浊了,说明沉淀溶解到水里面了。
      配置过胶体几丁质的过来人可以指导一下吗?提点建议。
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yc652090251

金虫 (小有名气)


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楼主能分享一下你用的几丁质培养基的配方么?
低调做人好么~~
7楼2012-09-18 18:12:13
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


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引用回帖:
Originally posted by 12zhangwei at 2010-08-29 22:53:23:
最近检测菌几丁质酶的产生,要配置胶体几丁质,看文献后,用下面的方法:
    2克几丁质(粉末)用预冷的浓盐酸45mL溶解,在磁力搅拌器上搅拌好,此时成黄色。搅拌2小时后,放入冰箱4摄氏度,静置24h。将盐酸混合 ...

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小木虫之有关部门负责人
2楼2010-08-30 00:50:04
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guozhibin

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
希望大家能够看到更好的来分享
4楼2010-08-30 20:11:02
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huibaby927

新虫 (小有名气)

为什么要定容啊,怎么配制1%的胶体几丁质?


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我制备的过程跟楼主的方法差不多,加完酸反应过夜后还有很多没有溶解的,滤液滴加到50%的乙醇中几乎白色的沉淀不明显,但是可以离心出来,离心的沉淀一加水就溶解了,不知道问题出在哪里。好多文献都说调ph后定容,不明白为什么
5楼2011-04-15 17:18:10
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