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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】胶体几丁质的制备过程分享
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12zhangwei

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】胶体几丁质的制备过程分享 已有12人参与

最近检测菌几丁质酶的产生，要配置胶体几丁质，看文献后，用下面的方法：
    2克几丁质（粉末）用预冷的浓盐酸45mL溶解，在磁力搅拌器上搅拌好，此时成黄色。搅拌2小时后，放入冰箱4摄氏度，静置24h。将盐酸混合液加入到300毫升的50%的酒精（预冷好的），搅拌2小时，此时为不透明的乳白色溶液，4000转离心20分钟，看到乳白色沉淀，，用蒸馏水反复洗，这里提一下，文献上都说用大量的蒸馏水冲洗，如果把沉淀收集起来的，用水冲洗，沉淀会被冲走的，损失很多，所以我做的时候，在离心管中加水，搅拌，离心。这个过程挺长的，最后离心的上清大约PH到6.5，我没在接着洗了，用水重悬沉淀，收集好后，直接定容到200mL.
       不过配好灭菌后，测了一下ph,为6.975.但是放置一会发现乳白色的悬浮物沉淀下来了，出现分层。
        而且配置0.5%的胶体几丁质培养基时，倒完平板，觉得还是可以看到颗粒的，感觉分散的不是很好。
      顺便提一下，第一次配置时，没有用50%的酒精，而是直接导入冷蒸馏水里面，水洗后ph4.0,灭菌后ph5点几，但那次倒完平板后看不到颗粒状物质，就是均一的分布的乳白色不透明的感觉，不过遇到的问题是，水洗到ph4.0后，在继续水洗的时候，离心效果不好，上清已经有点浑浊了，说明沉淀溶解到水里面了。
      配置过胶体几丁质的过来人可以指导一下吗？提点建议。
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1楼 2010-08-29 22:53:23
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huibaby927

新虫 (小有名气)

为什么要定容啊，怎么配制1%的胶体几丁质？

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我制备的过程跟楼主的方法差不多，加完酸反应过夜后还有很多没有溶解的，滤液滴加到50%的乙醇中几乎白色的沉淀不明显，但是可以离心出来，离心的沉淀一加水就溶解了，不知道问题出在哪里。好多文献都说调ph后定容，不明白为什么
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5楼2011-04-15 17:18:10
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
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引用回帖:
Originally posted by 12zhangwei at 2010-08-29 22:53:23:
最近检测菌几丁质酶的产生，要配置胶体几丁质，看文献后，用下面的方法：
    2克几丁质（粉末）用预冷的浓盐酸45mL溶解，在磁力搅拌器上搅拌好，此时成黄色。搅拌2小时后，放入冰箱4摄氏度，静置24h。将盐酸混合 ...

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小木虫之有关部门负责人
2楼2010-08-30 00:50:04
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guozhibin

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
希望大家能够看到更好的来分享
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4楼2010-08-30 20:11:02
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gogocancan

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我前一阵也做这个胶体几丁质了，我没有加乙醇，用水离心好长时间，最后我的依然很酸，我就用碱调了，PH不知道，不知道对产几丁质酶的菌株有没有影响？！~求知道的，给解释一下
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6楼2011-07-12 15:44:19
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