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【求助/交流】胶体几丁质的制备过程分享 已有12人参与
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最近检测菌几丁质酶的产生，要配置胶体几丁质，看文献后，用下面的方法： 2克几丁质（粉末）用预冷的浓盐酸45mL溶解，在磁力搅拌器上搅拌好，此时成黄色。搅拌2小时后，放入冰箱4摄氏度，静置24h。将盐酸混合液加入到300毫升的50%的酒精（预冷好的），搅拌2小时，此时为不透明的乳白色溶液，4000转离心20分钟，看到乳白色沉淀，，用蒸馏水反复洗，这里提一下，文献上都说用大量的蒸馏水冲洗，如果把沉淀收集起来的，用水冲洗，沉淀会被冲走的，损失很多，所以我做的时候，在离心管中加水，搅拌，离心。这个过程挺长的，最后离心的上清大约PH到6.5，我没在接着洗了，用水重悬沉淀，收集好后，直接定容到200mL. 不过配好灭菌后，测了一下ph,为6.975.但是放置一会发现乳白色的悬浮物沉淀下来了，出现分层。 而且配置0.5%的胶体几丁质培养基时，倒完平板，觉得还是可以看到颗粒的，感觉分散的不是很好。 顺便提一下，第一次配置时，没有用50%的酒精，而是直接导入冷蒸馏水里面，水洗后ph4.0,灭菌后ph5点几，但那次倒完平板后看不到颗粒状物质，就是均一的分布的乳白色不透明的感觉，不过遇到的问题是，水洗到ph4.0后，在继续水洗的时候，离心效果不好，上清已经有点浑浊了，说明沉淀溶解到水里面了。 配置过胶体几丁质的过来人可以指导一下吗？提点建议。 |
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5楼2011-04-15 17:18:10
scelab
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