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金黄色葡萄球菌的质粒该怎么提取？
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| 最近一直在做金黄色葡萄球菌质粒的提取,用的碱裂解法，第一步裂解用溶菌酶,浓度为20mg/ml，作用了半小时和一个半小时两种情况,但就是效果不太好。加上溶液2后就出现粉末样的东西，加上溶液3后有沉淀产生但不是絮状沉淀，离心后就感觉菌体沉积在底部了，不明白是细菌被裂解过头还是未被裂解。因为金黄色葡萄菌壁厚，怕没裂解，所以有人建议过使用碱裂解与煮沸法联用，但我不知该如何衔接，试了很多次了，至今都没效果。我要提的质粒是耐药菌株的质粒,不是工程质粒,比较大,估计拷贝数也比较低。大家有做过的能不能介绍一下经验,有哪些关键环节值得注意呢？十分感谢！ |
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