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xing1789

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】虚心请教已有3人参与

想请教几个问题：
一：昆虫细胞表达载体，pfastbacI和pfastBAcdua,这两个表达载体可以连接多大的目的片段l(最大能多大).
二:在提取重组杆粒的时候除了用手提提取之外,是否可以用Kit提取?如果可以用什么样的Kit?什么厂家?
三:用手提提取重组杆粒的时候,加完P1,P2,P3,离心之后上清液用无水乙醇沉淀杆粒和异丙醇沉淀杆粒哪个效果更好一些？怎样增加杆粒的纯度?减少蛋白的含量?
四：在做转染的时候细胞为什么没有变化？感染72小时细胞没有protocol说的那样细胞出现停止生长，膨胀等现象。是否可以说明在做转染的时候没有做好？病毒的毒力不高导致这种现象？
五：做转染的时候最好用那种转染试剂？

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昆虫细胞表达系统

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1楼 2010-08-24 16:56:14

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xudankuaile

新虫 (小有名气)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~ 2010-10-12 10:23:12

一，目的片段的大小不太确定，可以对参考一些文献，看看大家都做了哪些
二，有很多kit,厂家可以再别的论坛上寻找一下，不过传统法的效果也很好。
三，异丙醇和酒精都是有机溶剂，一般来讲，提取质粒的时候一开始都要用异丙醇沉淀，因为异丙醇沉淀的效果要好一些，但最后大多用酒精沉淀，因为酒精容易挥发，对下游的实验影响小。上清可以先用异丙醇沉淀再用乙醇沉淀，不冲突。
吸液体的时候小心不要吸到蛋白即可。
四，首次转染的病变不明显，一般在4~5d才略有变化，但是收毒后将病毒重新接毒则在72hCPE非常明显。
五，常用的有脂质体2000