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木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白质组学研究已有2人参与

请问做酶解蛋白肽谱分析时在酶解之前蛋白必须经过95度加热和urea作用吗？
如果想研究天然蛋白酶解机理的话是不是就不需要之前的处理了？

1楼 2010-08-24 13:01:25

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木虫 (小有名气)

引用回帖:

Originally posted by sqhnsd at 2010-08-24 15:21:12:

看你蛋白的结构了，一般来说，加入urea是蛋白变性（2M以上trypsin就失活了），空间结构打开，酶（一般为trypsin）就可以充分和蛋白接触，这样酶切效率比较高。

谢谢你的回复，请问如果之前不加入urea的话靠增加蛋白酶用量和延长酶切时间是否也能达到相同效果。
另外，酶解液中含有的盐（文献中好像一般用碳酸氢铵）是否会对后期的质谱鉴定产生影响呢？谢谢。

3楼2010-08-24 22:11:04

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金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):欢迎交流 2010-08-25 09:23:49

引用回帖:

Originally posted by ansrang at 2010-08-24 13:01:25:
请问做酶解蛋白肽谱分析时在酶解之前蛋白必须经过95度加热和urea作用吗？
如果想研究天然蛋白酶解机理的话是不是就不需要之前的处理了？

看你蛋白的结构了，一般来说，加入urea是蛋白变性（2M以上trypsin就失活了），空间结构打开，酶（一般为trypsin）就可以充分和蛋白接触，这样酶切效率比较高。

2楼2010-08-24 15:21:12

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