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ansrang

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白质组学研究 已有2人参与

请问做酶解蛋白肽谱分析时在酶解之前蛋白必须经过95度加热和urea作用吗?
如果想研究天然蛋白酶解机理的话是不是就不需要之前的处理了?
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):欢迎交流 2010-08-25 09:23:49
引用回帖:
Originally posted by ansrang at 2010-08-24 13:01:25:
请问做酶解蛋白肽谱分析时在酶解之前蛋白必须经过95度加热和urea作用吗?
如果想研究天然蛋白酶解机理的话是不是就不需要之前的处理了?

看你蛋白的结构了,一般来说,加入urea是蛋白变性(2M以上trypsin就失活了),空间结构打开,酶(一般为trypsin)就可以充分和蛋白接触,这样酶切效率比较高。
2楼2010-08-24 15:21:12
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ansrang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-24 15:21:12:

看你蛋白的结构了,一般来说,加入urea是蛋白变性(2M以上trypsin就失活了),空间结构打开,酶(一般为trypsin)就可以充分和蛋白接触,这样酶切效率比较高。

谢谢你的回复,请问如果之前不加入urea的话靠增加蛋白酶用量和延长酶切时间是否也能达到相同效果。
另外,酶解液中含有的盐(文献中好像一般用碳酸氢铵)是否会对后期的质谱鉴定产生影响呢?谢谢。
3楼2010-08-24 22:11:04
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