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周_yan

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by Illfxy at 2010-08-23 16:46:34:


谢谢你的回复,我准备重新挑菌做了。

不客气,祝你成功。
11楼2010-08-23 17:03:50
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gogohxy

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的量够吗?
12楼2010-08-23 17:19:16
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banhf

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
菌种鉴定用的是16SrRNA的序列,一般是PCR扩增出16SrDNA,TA克隆之T载体后用通用引物进行测序,不知道你是不是这样的实验流程。
你说的那几个500bp左右就没有信号的峰图可以分析一下乱峰之前的序列,如果这段序列可能形成某种二级结构,或是某个碱基的单一重复,那就会造成测序峰图走不下去,可以尝试用反向引物从另外一个方向测过去。
13楼2010-08-24 12:30:22
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Illfxy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by banhf at 2010-08-24 12:30:22:
菌种鉴定用的是16SrRNA的序列,一般是PCR扩增出16SrDNA,TA克隆之T载体后用通用引物进行测序,不知道你是不是这样的实验流程。
你说的那几个500bp左右就没有信号的峰图可以分析一下乱峰之前的序列,如果这段序 ...

谢谢回帖,我现在重新挑菌去测序了,先看看怎么样吧
探索人类未来的其中一人
14楼2010-08-29 10:50:28
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听海01

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,重做的结果测出来了吗?
15楼2014-03-24 19:01:00
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电魂

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
应该是质粒提的浓度太低,导致测序无信号或信号很差,建议延长摇菌时间,加水溶解,其它的TE,TB等buffer由于盐离子干扰,导致测序低峰很高而且容易中断。
16楼2014-03-24 20:19:25
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