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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】葡萄糖苷酶 动力学 求助
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Tiramisu6265

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】葡萄糖苷酶 动力学 求助 已有5人参与

本人做了α-葡萄糖苷酶活力测定，用PNPG做底物，按文献方法，看反应的进行过程 ，即看生成产物显色的吸光度随时间增加的趋势曲线
底物是过量的 文献上反应15min完全，为何我的1小时了，反应体系的吸光度还一直增加。。。
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1楼 2010-08-14 22:49:27
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看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by Tiramisu6265 at 2010-08-14 22:49:27:
本人做了α-葡萄糖苷酶活力测定，用PNPG做底物，按文献方法，看反应的进行过程 ，即看生成产物显色的吸光度随时间增加的趋势曲线
底物是过量的 文献上反应15min完全，为何我的1小时了，反应体系的吸光度还一直增 ...

中文的建议不要参考
即使是英文的 有时也很难那样作出
就自己摸索方法吧 可以变通 比如加热
只要线性即可
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2010-08-14 23:50:34
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-18 10:12:09
引用回帖:
Originally posted by Tiramisu6265 at 2010-08-14 22:49:27:
本人做了α-葡萄糖苷酶活力测定，用PNPG做底物，按文献方法，看反应的进行过程 ，即看生成产物显色的吸光度随时间增加的趋势曲线
底物是过量的 文献上反应15min完全，为何我的1小时了，反应体系的吸光度还一直增 ...

增加很正常啊，你的酶只要活着且底物没有用完都会增加的。具体条件你是要自己摸索的
建议你看看一些如何测定酶反应活性的资料先。
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3楼2010-08-16 12:24:14
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Tiramisu6265

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by Tiramisu6265 at 2010-08-14 22:49:27:
本人做了α-葡萄糖苷酶活力测定，用PNPG做底物，按文献方法，看反应的进行过程 ，即看生成产物显色的吸光度随时间增加的趋势曲线
底物是过量的 文献上反应15min完全，为何我的1小时了，反应体系的吸光度还一直增 ...

我测出的吸光度是一直增加 但是线性的 可以就这样测km吗
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4楼2010-08-18 10:08:01
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adou2008

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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看天(金币+6):处女贴 交流鼓励费 2010-08-18 11:03:44
我做的是自己克隆的（重组），测反应还要过夜呢。当时我奇怪，后来看到一个外文文献也是这样。所以，你还是要自己摸条件
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学习，学习，再学习
5楼2010-08-18 10:51:01
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Tiramisu6265

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-08-14 23:50:34:

中文的建议不要参考
即使是英文的 有时也很难那样作出
就自己摸索方法吧 可以变通 比如加热
只要线性即可

问个低级问题 假设酶与底物比例1：4，底物反应掉1后，是不是与底物结合的酶又恢复到最初状态，仍然可以催化酶解剩下的底物？

[ Last edited by Tiramisu6265 on 2010-8-18 at 11:13 ]
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6楼2010-08-18 11:00:41
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看天

木虫 (知名作家)
★
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Originally posted by Tiramisu6265 at 2010-08-18 11:00:41:

问个低级问题 假设酶与底物比例1：4，底物反应掉1后，与底物结合的酶又恢复到最初状态，仍然可以催化酶解剩下的底物？

郁闷 写了这么多竟然发送失败！！
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7楼2010-08-18 11:13:44
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Tiramisu6265

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-08-18 11:13:44:

郁闷 写了这么多竟然发送失败！！

麻烦继续指教啊~~知识贫瘠的我现在很纠结
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8楼2010-08-18 11:15:53
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看天

木虫 (知名作家)
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lstt09nk(金币+3):勤奋的斑斑~ 2010-08-18 12:43:23
引用回帖:
Originally posted by Tiramisu6265 at 2010-08-18 11:00:41:

问个低级问题 假设酶与底物比例1：4，底物反应掉1后，是不是与底物结合的酶又恢复到最初状态，仍然可以催化酶解剩下的底物？

[ Last edited by Tiramisu6265 on 2010-8-18 at 11:13 ]

再 简单些一下吧：
在任何情况下 理论上 反应速率都是与酶量呈正比的（不管底物不足还是过量 但只有在底物过量时酶活（催化的反应速率）才是最大的 而且只有在底物过量时 才认为反应速率是恒定的） 所以你的线性时间很长 可以考虑改变一下酶的用量 来确定是不是反应有问题 还是反应确实是进行的比较慢 比如你的酶量变为原先的一半 如果直线斜率也是大约原先的一半 说明反应没问题 线性可信 可以用来确定酶活
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9楼2010-08-18 11:19:59
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Tiramisu6265

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-08-18 11:19:59:

再 简单些一下吧：
在任何情况下 理论上 反应速率都是与酶量呈正比的（不管底物不足还是过量 但只有在底物过量时酶活（催化的反应速率）才是最大的 而且只有在底物过量时 才认为反应速率是恒定的） 所以你的线 ...

多谢啦~~
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10楼2010-08-18 12:42:39
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