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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】什么时候需要冷冻离心？
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peximin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】什么时候需要冷冻离心？ 已有6人参与

各位大侠，我要用超声的方法提取细菌蛋白，首先取一定体积的细菌离心，要其沉淀，再用裂解液重悬，之后超声，再离心，要上清。
两次离心中，都需要冷冻离心吗？后者用普通离心机对蛋白有影响吗？
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1楼 2010-08-13 11:14:15
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bunny0512

银虫 (小有名气)
★
peximin(金币+1):谢谢参与
我们这样制取蛋白的时候,都是用4摄氏度离心的,为的是减少蛋白的降解
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在哪里~在哪里见过你~
2楼2010-08-13 11:23:11
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zhixuec

木虫 (著名写手)
★
peximin(金币+1):谢谢参与
不要在常温下离心，会降解的

4摄氏度离心，效果好！
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酷爱の族
3楼2010-08-13 11:47:50
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henkally

禁虫 (著名写手)
★
peximin(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
4楼2010-08-13 11:50:04
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无风的小屋

金虫 (小有名气)
★
peximin(金币+1):谢谢参与
对，两次都用冷冻离心，以防蛋白的降解，其他操作也应尽量低温处理
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Nocross，nocrown.
5楼2010-08-13 16:07:07
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
peximin(金币+1):谢谢参与
含pmsf也可以不低温，但最好是低温
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6楼2010-08-13 16:09:53
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peximin

金虫 (小有名气)
谢谢各位啦！
另外还有一个问题，当我第一次离心完了之后，用tris溶液洗了两次，发现菌液发黏，请问这是正常现象吗？
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7楼2010-08-13 16:23:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌液发黏该不会是离爆了然后DNA释放出来缠绕在一起了
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8楼2010-08-13 18:28:19
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
冷冻离心无非是要保证酶在低温下，使其不失去活性
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9楼2010-08-13 19:58:06
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by peximin at 2010-08-13 11:14:15:
各位大侠，我要用超声的方法提取细菌蛋白，首先取一定体积的细菌离心，要其沉淀，再用裂解液重悬，之后超声，再离心，要上清。
两次离心中，都需要冷冻离心吗？后者用普通离心机对蛋白有影响吗？

常温一般不推荐，不过如果条件达不到，你可以室温离心之后，跑胶看看你的蛋白有没有讲解。
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10楼2010-08-13 21:57:14
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