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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~
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匿名

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-06 23:49:03
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61楼2010-08-16 21:37:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
scelab(金币+1):自己多动手先，然后再问别人，这样比较好，哎，我也缺乏者素质啊，哈哈 2010-09-06 23:49:42
引用回帖:
Originally posted by xinguang55 at 2010-08-16 21:37:13:



都说了只能用化学方法了，酶根本进不去，就算进去了，那个核仁也是一种复合物，生物方法是不行的。等待中、。。。。

祝你好运，求人不如求己……如果找遍文献都没法找到，那么就只好靠自己咯~~话说要做这么纠结的实验来干嘛呢？下面准备研究啥呢，好奇~
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62楼2010-08-16 22:26:13
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dhd997

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请教一下，凋亡都有哪些方法？或者试剂盒？这个问题有点泛，举个例子吧
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
63楼2010-08-17 08:21:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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看天(金币+3):太热心了 2010-08-17 13:37:40
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Originally posted by dhd997 at 2010-08-17 08:21:42:
请教一下，凋亡都有哪些方法？或者试剂盒？这个问题有点泛，举个例子吧

凋亡是个动态过程，可以人为地将其划分为早、中、晚期

早：相关凋亡通路被激活，如死亡受体、p53感应到DNA损伤，或者ER途径的Ca2+胁迫等。然后，定位于细胞膜内侧的PS会外翻，线粒体膜电位改变，细胞色素C释放等就开始执行

早期的检测方法有受体活性，测线粒体膜电位（染色），Annexin V/PI双染PS检测是否外翻，胞浆Cyto C释放量等等

中：各类Caspase开始被激活，不同的凋亡通路激活的Cas不一样，但最终都是要激活Cas-3。这里就有很多的试剂盒可以检测Cas的活性。

晚：DNA开始剪切，细胞开始形成凋亡小体。这就可以染Hoechst、看电镜等方法从形态学上研究，还有经典的跑DNA ladder电泳
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64楼2010-08-17 08:57:44
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-17 08:57:44:


凋亡是个动态过程，可以人为地将其划分为早、中、晚期

早：相关凋亡通路被激活，如死亡受体、p53感应到DNA损伤，或者ER途径的Ca2+胁迫等。然后，定位于细胞膜内侧的PS会外翻，线粒体膜电位改变，细胞色素C ...

太帅气了，下次具体请教。
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65楼2010-08-17 10:35:23
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匿名

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66楼2010-08-18 13:13:10
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tuziluojie

银虫 (小有名气)
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请问楼主做过SSH不？我现在刚开始起步，目前提完RNA，质量什么的都还不错，但是mRNA分离之后的浓度太低，不能直接做ssh，另外我的样品有限，不敢浪费。请问楼主对mRNA浓缩方面有什么好的建议
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67楼2010-08-20 08:59:47
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feiye2214

木虫 (正式写手)

问个有关质粒的问题

★
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pGEX-4T-1 plasmid 是不是可以用蓝白筛选？还是有其他的什么抗性？
小弟不明，望指教
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68楼2010-08-20 09:24:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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看天(金币+2):鼓励一下吧 2010-08-20 14:02:19
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-20 09:24:12:
pGEX-4T-1 plasmid 是不是可以用蓝白筛选？还是有其他的什么抗性？
小弟不明，望指教

没用过这个质粒，但看起来，MCS并不在Lac Z基因处，那应该是不能进行蓝白斑的了
有氨苄抗性，所以用氨苄来筛就好了
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69楼2010-08-20 09:58:05
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feiye2214

木虫 (正式写手)
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scelab:你如果有质粒的全序列的话，可以blast一下，看看相关的orf的功能 2010-09-06 23:50:57
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-20 09:58:05:


没用过这个质粒，但看起来，MCS并不在Lac Z基因处，那应该是不能进行蓝白斑的了
有氨苄抗性，所以用氨苄来筛就好了

氨苄霉素是吧，多谢了
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70楼2010-08-20 09:59:50
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