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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~
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feiye2214

木虫 (正式写手)

ATP不知道还在不在？

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我今晚做链接：
连接前鉴定过待连接的片段，没问题（试剂盒连接）；
连接16度、45min，跑胶后居然没有带！！
个人觉得：没有连接成功的片段，不是应该也会跑出带吗？怎么会消失呢，降解了？？
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51楼2010-08-14 20:56:06
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匿名

用户注销 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):信任鼓励 常来 2010-08-14 23:51:21
看天(金币-4):不好意思 刚看到区长已经奖励过了 2010-08-14 23:55:36
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52楼2010-08-14 20:57:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-14 20:56:06:
我今晚做链接：
连接前鉴定过待连接的片段，没问题（试剂盒连接）；
连接16度、45min，跑胶后居然没有带！！
个人觉得：没有连接成功的片段，不是应该也会跑出带吗？怎么会消失呢，降解了？？

连接完的产物要马上转化啊~~怎么能拿来跑胶？？？
一般情况下连接物只有那么一丁点，跑胶绝对看不见……
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53楼2010-08-14 21:16:53
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feiye2214

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-14 21:16:53:


连接完的产物要马上转化啊~~怎么能拿来跑胶？？？
一般情况下连接物只有那么一丁点，跑胶绝对看不见……

小弟愚昧，多谢指教
我也做了一个4度过夜的，明天转化
赞一下(1人) 回复此楼
54楼2010-08-14 22:08:40
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-14 22:08:40:

小弟愚昧，多谢指教
我也做了一个4度过夜的，明天转化

祝成功
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55楼2010-08-14 23:36:38
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看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2010-08-14 19:04:25:

恩，谢谢！这个网站我也去看过，还在研究之中，此外还有biocarta,genmapp等网站也看了下，我找下看有没有做这方面的虫友了……

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-14 18:26:52:


呵呵，这个的话，问做芯片的技术支持最好了，可以约他们面对面交流
http://www.geneontology.org/
这个网址有很多GO的工具和介绍

mark 一下 日后或许会接触分子
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
56楼2010-08-14 23:53:46
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feiye2214

木虫 (正式写手)

ATP在么？

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-14 23:36:38:


祝成功

卡那霉素抗性筛选和蓝白筛选是不是一个作用？
蓝白筛选的机理是什么？是不是在每个质粒上都有相关基因啊？好像培养基中也要加什么东东哦？
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57楼2010-08-16 11:29:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+2):辛苦~~ 2010-08-16 21:29:36
看天(金币+1):鼓励一下 2010-08-17 13:36:48
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-16 11:29:58:

卡那霉素抗性筛选和蓝白筛选是不是一个作用？
蓝白筛选的机理是什么？是不是在每个质粒上都有相关基因啊？好像培养基中也要加什么东东哦？

蓝白斑筛选的原理你百度一下都有，具体操作步骤网上也到处都是
用抗生素筛选的话，意思就是能够筛出转化子，但成功转化的不一定含有你的目的基因，有可能是空质粒
蓝白斑筛选就是能够直接从颜色判断哪个克隆是含有插入片段的
不过要你的质粒支持才行
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58楼2010-08-16 12:09:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by xinguang55 at 2010-08-14 20:57:35:
小生最近在处理真菌的孢子，先已把孢子的内部物质基本清除，只含有细胞壁（乙醇不溶，甲醇和水可以溶解，极性很强）和中间的一个很小的核（显微镜观察），重大小来看因该是核仁，跪求科学达人教我咋用化学方法把它 ...

明明就记得在这里回答过
难道我忘记点提交键？

如果你确定是核仁，用酶消化就好了。DNase和RNase应该足够破坏掉，然后里头肯定会有核蛋白污染的，不过就看你想做什么后续实验了
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59楼2010-08-16 21:22:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
看天(金币+2):鼓励一下 2010-08-17 13:37:01
引用回帖:
Originally posted by xinguang55 at 2010-08-14 20:57:35:
小生最近在处理真菌的孢子，先已把孢子的内部物质基本清除，只含有细胞壁（乙醇不溶，甲醇和水可以溶解，极性很强）和中间的一个很小的核（显微镜观察），重大小来看因该是核仁，跪求科学达人教我咋用化学方法把它 ...

不过我说的酶解法，也不一定成，因为要酶能穿透进去才行
我想你可以找找文献看有没有人做过
如果是有现成的经典方法，应该能找到，如果是你新发明的方法，那么你得反复验证确确实实获得了产物而且没有改变其性质之类的
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60楼2010-08-16 21:29:12
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