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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】MTT实验中加MTT不显紫色
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★
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Originally posted by Annel at 2010-08-10 09:08:05:



是啊，吸掉上清之后加MTT，但是一直没有紫色结晶，按说活细胞的话加了MTT会有紫色结晶生成才对呀，到现在都已经一天多了，还没有显色

不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时，然后吸掉液体，再加DMSO,在495处测吸收。
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梦在路就在！
11楼2010-08-10 14:38:55
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Annel

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-08-10 14:38:55:


不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时，然后吸掉液体，再加DMSO,在495处测吸收。

有的是先不吸掉液体，加MTT,有的是吸掉加MTT，我觉得影响应该都不是很大吧，我都试过了，开始没吸掉，加了MTT，4h没颜色，我怀疑可能药物跟MTT反应了。然后就吸掉液体，PBS洗了两次，重新加了MTT ，4h后结果还是没有颜色
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12楼2010-08-10 14:44:47
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Annel

金虫 (小有名气)
不要沉了啊，我的问题还没解决呢
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13楼2010-08-11 10:56:01
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cherryglen

金虫 (小有名气)
★
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试剂真的是MTT吗？有没有用错别的？

MTT的话，雪山飞狐是正解


Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-08-10 14:38:55:


不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时，然后吸掉液体，再加DMSO,在495处测吸收。
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2285000&fpage=0&view=&highlight=&page=2
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执子之手，与子偕老
14楼2010-08-11 11:07:10
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Annel

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cherryglen at 2010-08-11 11:07:10:
试剂真的是MTT吗？有没有用错别的？

MTT的话，雪山飞狐是正解


Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-08-10 14:38:55:


不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时，然后吸掉液体，再加DMSO,在495处测吸 ...

这个我也试过了，我放在那里两天没管倒是现在生成了紫色结晶，没有细胞的孔里也有。按说只要是活细胞加MTT应该就会显色的吧？
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15楼2010-08-11 11:26:34
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cherryglen

金虫 (小有名气)
★
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如果操作没错，应该就是试剂有问题吧。

你配的MTT是什么颜色？加到培养基什么颜色？建议楼主重新看下试剂
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执子之手，与子偕老
16楼2010-08-13 14:31:35
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梧桐如雪

铜虫 (小有名气)
★
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死细胞也会染上一些MTT这倒是真的，怎么活细胞却一点没染上呢，真奇怪啊。难道你的细胞不产脱氢酶？还有，一个孔100ul 啊？看样子不是96孔板，是24孔板啊。同情下楼主，要不试试别的染色方法呗。比如最原始的结晶紫。
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17楼2010-08-13 15:16:01
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Annel

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 梧桐如雪 at 2010-08-13 15:16:01:
死细胞也会染上一些MTT这倒是真的，怎么活细胞却一点没染上呢，真奇怪啊。难道你的细胞不产脱氢酶？还有，一个孔100ul 啊？看样子不是96孔板，是24孔板啊。同情下楼主，要不试试别的染色方法呗。比如最原始的结晶 ...

谢谢支持啊，是96孔板，开始我用的6倍稀释了的MTT，一孔加60ul，没有反应，我就想那就多加点试试，就加了没有稀释的MTT，还是不行，到后来过了两三天倒是开始生成结晶紫了，不过肯定不准了
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18楼2010-08-13 15:42:23
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梧桐如雪

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的MTT哪里来的？有没有过期啊之类的？我用过三种，一种国内某公司，不详，需要挖最下面的粉末配，上面的不能用，凑活用用。一种生工的，不太好用。后来买了sigma，比较灵光。于是我们老板说：以后不要给我省钱！实验做出来才是硬道理！
一般96孔板里加20ul，每孔细胞数在10000个以下，就足够反应的了。4个小时就完全可以达到最佳的反应时间。你的过那几天才形成所谓的甲赞，肯定不准了。换个MTT，你要是上海的，我倒是可以偷偷给你一点（千万别有人认得我）……呵呵。
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19楼2010-08-13 16:12:39
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Annel

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 梧桐如雪 at 2010-08-13 16:12:39:
你的MTT哪里来的？有没有过期啊之类的？我用过三种，一种国内某公司，不详，需要挖最下面的粉末配，上面的不能用，凑活用用。一种生工的，不太好用。后来买了sigma，比较灵光。于是我们老板说：以后不要给我省钱！ ...

我买的是sigma的，我试了用骨髓瘤细胞直接加MTT4个小时可以生成紫色结晶的，我那个细胞的话铺板的时候是2000个/孔的，贴壁细胞，培养一天之后加药物培养44小时，加MTT的。
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20楼2010-08-13 18:58:29
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