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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫


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Originally posted by Annel at 2010-08-10 09:08:05:



是啊,吸掉上清之后加MTT,但是一直没有紫色结晶,按说活细胞的话加了MTT会有紫色结晶生成才对呀,到现在都已经一天多了,还没有显色

不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时,然后吸掉液体,再加DMSO,在495处测吸收。
梦在路就在!
11楼2010-08-10 14:38:55
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Annel

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-08-10 14:38:55:


不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时,然后吸掉液体,再加DMSO,在495处测吸收。

有的是先不吸掉液体,加MTT,有的是吸掉加MTT,我觉得影响应该都不是很大吧,我都试过了,开始没吸掉,加了MTT,4h没颜色,我怀疑可能药物跟MTT反应了。然后就吸掉液体,PBS洗了两次,重新加了MTT ,4h后结果还是没有颜色
12楼2010-08-10 14:44:47
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Annel

金虫 (小有名气)

不要沉了啊,我的问题还没解决呢
13楼2010-08-11 10:56:01
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cherryglen

金虫 (小有名气)


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试剂真的是MTT吗?有没有用错别的?

MTT的话,雪山飞狐是正解


Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-08-10 14:38:55:


不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时,然后吸掉液体,再加DMSO,在495处测吸收。
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2285000&fpage=0&view=&highlight=&page=2
执子之手,与子偕老
14楼2010-08-11 11:07:10
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Annel

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by cherryglen at 2010-08-11 11:07:10:
试剂真的是MTT吗?有没有用错别的?

MTT的话,雪山飞狐是正解


Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-08-10 14:38:55:


不是应该在每孔先加MTT反应2-3小时,然后吸掉液体,再加DMSO,在495处测吸 ...

这个我也试过了,我放在那里两天没管倒是现在生成了紫色结晶,没有细胞的孔里也有。按说只要是活细胞加MTT应该就会显色的吧?
15楼2010-08-11 11:26:34
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cherryglen

金虫 (小有名气)


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如果操作没错,应该就是试剂有问题吧。

你配的MTT是什么颜色?加到培养基什么颜色?建议楼主重新看下试剂
执子之手,与子偕老
16楼2010-08-13 14:31:35
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梧桐如雪

铜虫 (小有名气)


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死细胞也会染上一些MTT这倒是真的,怎么活细胞却一点没染上呢,真奇怪啊。难道你的细胞不产脱氢酶?还有,一个孔100ul 啊?看样子不是96孔板,是24孔板啊。同情下楼主,要不试试别的染色方法呗。比如最原始的结晶紫。
17楼2010-08-13 15:16:01
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Annel

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 梧桐如雪 at 2010-08-13 15:16:01:
死细胞也会染上一些MTT这倒是真的,怎么活细胞却一点没染上呢,真奇怪啊。难道你的细胞不产脱氢酶?还有,一个孔100ul 啊?看样子不是96孔板,是24孔板啊。同情下楼主,要不试试别的染色方法呗。比如最原始的结晶 ...

谢谢支持啊,是96孔板,开始我用的6倍稀释了的MTT,一孔加60ul,没有反应,我就想那就多加点试试,就加了没有稀释的MTT,还是不行,到后来过了两三天倒是开始生成结晶紫了,不过肯定不准了
18楼2010-08-13 15:42:23
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梧桐如雪

铜虫 (小有名气)


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你的MTT哪里来的?有没有过期啊之类的?我用过三种,一种国内某公司,不详,需要挖最下面的粉末配,上面的不能用,凑活用用。一种生工的,不太好用。后来买了sigma,比较灵光。于是我们老板说:以后不要给我省钱!实验做出来才是硬道理!
一般96孔板里加20ul,每孔细胞数在10000个以下,就足够反应的了。4个小时就完全可以达到最佳的反应时间。你的过那几天才形成所谓的甲赞,肯定不准了。换个MTT,你要是上海的,我倒是可以偷偷给你一点(千万别有人认得我)……呵呵。
19楼2010-08-13 16:12:39
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Annel

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 梧桐如雪 at 2010-08-13 16:12:39:
你的MTT哪里来的?有没有过期啊之类的?我用过三种,一种国内某公司,不详,需要挖最下面的粉末配,上面的不能用,凑活用用。一种生工的,不太好用。后来买了sigma,比较灵光。于是我们老板说:以后不要给我省钱! ...

我买的是sigma的,我试了用骨髓瘤细胞直接加MTT4个小时可以生成紫色结晶的,我那个细胞的话铺板的时候是2000个/孔的,贴壁细胞,培养一天之后加药物培养44小时,加MTT的。
20楼2010-08-13 18:58:29
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