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abaiwoaini

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】关于叶酸和脂质体脂材（氨基-PEG-DSPE）反应连接的几个问题已有6人参与

附件为我copy的截图，利用“氨基-PEG-DSPE”和“叶酸”反应生成“叶酸-PEG-DSPE”，其中有几个问题请教：

一、第2步：
1、如果原料的量减为四分之一，DMSO减为1mL，这样的话吡啶减为0.5mL是否合适？即，根据吡啶在反应中的作用，如果其他原料试剂均减为四分之一，吡啶是否可以等比例减少来设计实验？
2、如果其他原料和试剂的量均不变，只是“氨基-PEG2K-DSPE”的量减为四分之一，吡啶的量还有必要变化吗？
3、吡啶如果用三乙胺代替，加入量如何改变？

二、第5步：
1、为什么要除掉吡啶？可否省去这步？
2、吡啶的沸点约115度，如何实现这一步？

三、第6步：
加水的目的是否只是为了除去DCC(DCU)？还有其他目的吗？可否省去？

四、第7步：
1、为什么用这么大截留分子量的透析管？产物（MW 3000多）岂不是也漏掉了？
2、分别用盐水和水透析的目的是？直接用水透析不行？
3、普通的透析材料能否耐受DMSO？需要特殊材料的透析管或透析袋？

五、第10步：
利用FA的吸光系数，通过测定FA-PEG-DSPE的吸光度来确定含量是否合理？FA-PEG-DSPE的吸光系数和FA的吸光系数一致？

本人非合成专业人士，望虫友们不吝赐教！多谢！

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1楼2010-08-07 20:53:55

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abaiwoaini

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3楼2010-08-09 19:50:56

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abaiwoaini

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截图中的文字内容如下：

1、将叶酸（FA、100mg，0.244 mmol）溶于4mL DMSO。

2、向FA-DMSO溶液中加入氨基-PEG 2K-DSPE（400mg，0.14 mmol)、吡啶(2mL)和二环己基碳二酰亚胺（130mg，0.63mmol）。

3、室温反应4h。

4、用TLC监测产物的生成和氨基-PEG 2K-DSPE的消失。

5、用旋转蒸发仪蒸去吡啶。

6、向溶液中加入50 mL水，离心除去微量不溶物。

7、将离心得到的上清液置于Spectra/Por CE (Spectrum, Houston, TX)管中 (MW cutoff of 300,000 Da)，用盐水(50 mM, 2×2000 ml) 和水 (3×2000 ml) 透析。

8、确定透析物只含有产物（TLC显示一个斑点），将透析物的水溶液冻干。

9、进一步用P2O5真空干燥。

10、利用FA在285nm的吸光系数为27500 L•mol•cm-1，通过测定连接物甲醇液（0.05mg/mL）的UV吸收来确定FA 的含量。FA 的含量：FA-PEG2000-DSPE 0.29mmol/g（理论值的94％，0.31mmol/g）。