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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】柱材料怎么处理？
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cnlics

木虫 (小有名气)
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看天(金币+5):热心回答 2010-07-31 13:21:37
你的胶要煮一煮，然后静置，等胶差不多全部沉淀后，把上面还悬浮着的小颗粒倒掉；还可以把胶搅起来，稍微静置，然后把上层胶转移到另外一个容器中。这样做的目的是提高胶颗粒的均一性，装柱的时候就更均匀了。煮过的胶，静置冷却后，可以直接装柱，不用抽气，因为煮的过程已经去气了。装柱关键在于操作方面，先把柱子里面加上5cm左右的缓冲液，把胶轻缓地搅匀，然后用玻棒引流，把胶溶液均匀又较快地流入柱中，等胶沉淀完毕，流掉一部分缓冲液，还留10cm左右，把上层胶再轻缓地搅匀，继续加胶。如此如此。。。。装柱要轻柔，要诀是不能产生气泡。

柱色谱，要的是细心，耐性和体力。无论男女做，都是苦差事。

如果感觉胶不干净了，就用1N的NaOH浸泡过夜。所谓1N就是称40g的NaOH溶于1L的水中。

Sephadex是葡聚糖，最好别用酸泡，那样会发生水解。好像工业上生产葡萄糖，就是用寡糖酸解的。

[ Last edited by cnlics on 2010-7-31 at 11:11 ]
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11楼2010-07-31 10:59:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
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呵呵，不用谢，把一些实验数据发上来让大家看看吧，比如说柱床体积多少啊，高和直径各多少，用蓝色葡聚糖过柱测出外水体积多少啊，上样一毫升蓝色葡聚糖，收集液里多少毫升是蓝色的，蓝色葡聚糖的峰是否sharp啊，还有，分离一些含有多个蛋白质的样品时能不能有效分开，PAGE图怎样啊，等等。这些数据才能反映装柱效果啊呵呵。有图才有真相。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
12楼2010-07-31 14:36:42
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