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cnlics

木虫 (小有名气)

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看天(金币+5):热心回答 2010-07-31 13:21:37
你的胶要煮一煮,然后静置,等胶差不多全部沉淀后,把上面还悬浮着的小颗粒倒掉;还可以把胶搅起来,稍微静置,然后把上层胶转移到另外一个容器中。这样做的目的是提高胶颗粒的均一性,装柱的时候就更均匀了。煮过的胶,静置冷却后,可以直接装柱,不用抽气,因为煮的过程已经去气了。装柱关键在于操作方面,先把柱子里面加上5cm左右的缓冲液,把胶轻缓地搅匀,然后用玻棒引流,把胶溶液均匀又较快地流入柱中,等胶沉淀完毕,流掉一部分缓冲液,还留10cm左右,把上层胶再轻缓地搅匀,继续加胶。如此如此。。。。装柱要轻柔,要诀是不能产生气泡。

柱色谱,要的是细心,耐性和体力。无论男女做,都是苦差事。

如果感觉胶不干净了,就用1N的NaOH浸泡过夜。所谓1N就是称40g的NaOH溶于1L的水中。

Sephadex是葡聚糖,最好别用酸泡,那样会发生水解。好像工业上生产葡萄糖,就是用寡糖酸解的。

[ Last edited by cnlics on 2010-7-31 at 11:11 ]
11楼2010-07-31 10:59:25
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呵呵,不用谢,把一些实验数据发上来让大家看看吧,比如说柱床体积多少啊,高和直径各多少,用蓝色葡聚糖过柱测出外水体积多少啊,上样一毫升蓝色葡聚糖,收集液里多少毫升是蓝色的,蓝色葡聚糖的峰是否sharp啊,还有,分离一些含有多个蛋白质的样品时能不能有效分开,PAGE图怎样啊,等等。这些数据才能反映装柱效果啊呵呵。有图才有真相。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
12楼2010-07-31 14:36:42
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