【分享】关于载体双酶切的一些经验 - 分子生物 - 综合其他

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swordhang

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Originally posted by liyong1981 at 2010-07-30 12:00:06:
PCR产物酶切，你考虑效率了吗？

3-6kb pcr产物效率应该不会太低，我做过pet29a和puc19，酶切效率你用什么方法都会有，但pcr的载体即使酶切不完全也不会自连

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11楼2010-07-30 14:06:20

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swordhang

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Originally posted by 刘小乐 at 2010-07-30 10:30:31:
方法不错的，不过有个疑问想请教一下，载体是环状质粒吗？引物怎么设计的？

和设计普通引物没有区别

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12楼2010-07-30 14:07:44

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nnsulei

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怕P出来的片段有突变啊 ~

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努力做就有结果～

13楼2010-08-02 15:52:03

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xiangquanju

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lstt09nk(金币+1):鼓励交流~~ 2010-08-02 17:15:05

PCR载体序列，保证PCR过程中没有突变，感觉可行性很小~~载体双酶切还是比较好弄的，可以分步酶切，因为是双酶切，自连应该很小，但要保证两个酶的酶切效果都比较好，在做链接的时候需要做个对照，就是降酶切产物直接进行连接反应，如果不是建库什么的，挑出重组子还是比较可以的

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14楼2010-08-02 16:38:28

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用两种酶分别单酶切然后交叉酶切就知道载体能不能被切开了

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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

15楼2010-08-03 18:15:56

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tanxi125

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你为啥这样切呢，是不是为了摸索条件，PCR扩增可能会出现扩增错误，如果恰好出现在酶切问点，可能就切不了了啊，到时候就不知道是啥原因了~

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什么都得靠自己！我现在深刻理解！

16楼2011-01-12 14:53:31

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sanmaoecho

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酶切载体体系做大一点，载体量少一点，时间长一点，一般就切完全了，真不成就回收之后用碱性磷酸酶处理一下载体，就不会自连接了

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我们对於那份面向未来的勇气，过於渴求而被过去所迷惑

17楼2011-01-12 21:30:19

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xiezhenrong

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想法新颖，倒可借鉴一下

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海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！

18楼2011-03-23 12:04:45

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zhangxn2010

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既然自己都连不上，那加上外源ＤＮＡ还能连上吗？

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一直向前！

19楼2011-03-23 13:33:23

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shan-sa

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么有看懂LZ的方法是怎么个情况里

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20楼2011-03-23 15:59:12

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