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swordhang

金虫 (小有名气)

[交流] 【分享】关于载体双酶切的一些经验 已有17人参与

双酶切时要是有一个酶酶切不完全时,就会导致载体自连

我的做法是用引物把载体pcr出来,再进行酶切,这样不管怎么样都不可能出现载体自连的情况,而且还省得提质粒了
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~~ 2010-08-02 17:15:05
PCR载体序列,保证PCR过程中没有突变,感觉可行性很小~~载体双酶切还是比较好弄的,可以分步酶切,因为是双酶切,自连应该很小,但要保证两个酶的酶切效果都比较好,在做链接的时候需要做个对照,就是降酶切产物直接进行连接反应,如果不是建库什么的,挑出重组子还是比较可以的
14楼2010-08-02 16:38:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


lstt09nk(金币+1):是的 2010-07-30 09:59:14
载体小的时候还可以,如果载体大了PCR就不是很方便吧,不过这方法还真是标新立异。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-07-29 23:20:35
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w.king124

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
通过菌落PCR一般都能找到转化成功的菌株,这个方法还是第一次听说
3楼2010-07-30 09:40:33
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zxping11230

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用引物PCR载体不现实!
快乐的科研
5楼2010-07-30 10:24:41
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