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swordhang

金虫 (小有名气)

[交流] 【分享】关于载体双酶切的一些经验 已有17人参与

双酶切时要是有一个酶酶切不完全时,就会导致载体自连

我的做法是用引物把载体pcr出来,再进行酶切,这样不管怎么样都不可能出现载体自连的情况,而且还省得提质粒了
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切载体体系做大一点,载体量少一点,时间长一点,一般就切完全了,真不成就回收之后用碱性磷酸酶处理一下载体,就不会自连接了
我们对於那份面向未来的勇气,过於渴求而被过去所迷惑
17楼2011-01-12 21:30:19
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


lstt09nk(金币+1):是的 2010-07-30 09:59:14
载体小的时候还可以,如果载体大了PCR就不是很方便吧,不过这方法还真是标新立异。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-07-29 23:20:35
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w.king124

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
通过菌落PCR一般都能找到转化成功的菌株,这个方法还是第一次听说
3楼2010-07-30 09:40:33
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zxping11230

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用引物PCR载体不现实!
快乐的科研
5楼2010-07-30 10:24:41
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